試劑 盒使用說明書
本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關液體樣本中 補體3a（C3a） 含量。
實驗原理 ：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定 標本 中 小鼠 補體3a （ C3a ） 水平。用純化的 小鼠 C3a 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 補體3a （ C3a ）， 再與HRP 標記的 C3a 抗體結合，形成抗體- 抗原 - 酶標抗體復合物 ，經(jīng)過*洗滌后 加 底物TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 C3a 呈正相關。用酶標儀在 450 nm波長下測定吸光度（ OD 值）， 通過標準曲線 計算樣品 中小鼠 補體3a （ C3a ） 濃度。
試劑盒組成 ：
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片（ 48 ） | 2片（ 96 ） | |
密封袋 | 1個 | 1個 | |
酶標包被板 | 1 ×48 | 1 ×96 | 2-8℃保存 |
標準品： 180 μ g/ml | 0.5ml× 1 瓶 | 0.5ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
標準品稀釋液 | 1.5ml× 1 瓶 | 1.5ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 3 ml× 1 瓶 | 6 ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml× 1 瓶 | 6 ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A 液 | 3 ml× 1 瓶 | 6 ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B 液 | 3 ml× 1 瓶 | 6 ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml× 1 瓶 | 6ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 | （20ml × 20 倍）× 1 瓶 | （20ml × 30 倍）× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
樣本處理及要求 ：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?2-8 ℃的溫度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可 將標本放于 -20 ℃保存，但 應 避免反復凍融 .
7. 不能檢測含NaN3的樣品 ，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（ HRP ）活性。
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