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可溶性抗原的制備-菌脂多糖的制備

時間:2013-8-8閱讀:373
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(一)熱酚提取法
    原理是將細(xì)菌懸液加于熱酸——水混合液中,冷卻,離心混合液可分為水溶液層,內(nèi)含水溶性脂多糖及核酸等及酸層、內(nèi)含蛋白質(zhì)。近年來發(fā)現(xiàn)在酸層中也含糖類。經(jīng)離心后沉淀含細(xì)胞殘體。
1.細(xì)菌濃懸液用鹽水經(jīng)2500r/min,20min離心洗滌一次。
2.將沉淀的菌混勻于蒸餾水中,放66℃水浴,然后滴加等量的90%熱酚溶液(預(yù)熱至66℃),邊加邊搖,而后在66℃水浴中攪拌25min。
3.在水浴中冷卻,于4℃冰箱過夜。
4.以2000r/min離心15min。
5.將上層水溶液吸到另一試管中。
6.剩下的酚層及殘渣組分可再加上述同量水在熱水浴中攪拌30min,冷卻,離心,取上層水溶液。將兩次提的水溶液混合,置透析袋中于生理鹽水中透析2天,其間換幾次鹽水,以除去酚。
7.透析后的水溶液層經(jīng)濃縮(如用聚乙二醇在透析袋外層涂抹以除去水分)。即成粗制脂多糖,于冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br />(二)超聲波處理法
1.獲得的菌液經(jīng)2500r/min,20min離心洗滌1-2次,將沉淀配成2倍于濕菌濃度的濃菌液。
2.用超聲波發(fā)生器中頻(約相當(dāng)于12000cps)處理20min。
3.處理液經(jīng)3000r/min,離心30min,吸取上清液即為脂多糖抗原。置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br />(三)煮沸法
    將培養(yǎng)后得到的濃菌液沸水浴煮沸2h。置冰箱靜置兩星期以上(使菌體殘渣自由下沉)。3000r/min離心30min,取上清夜即為粗脂多糖抗原,置冰箱中保存?zhèn)溆谩?/span>

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