谷氨酸（Glu）含量測定試劑盒說明書

【資料簡介】

測定意義：
Glu 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的20 種氨基酸之一，
而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外，Glu 還是
味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生物試劑。

測定原理：
利用提取液提取，然后用顯色劑進(jìn)行顯色，顯色后在570nm 下進(jìn)行測定。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、
蒸餾水。

試劑的組成和配制：
試劑一：液體120mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶， 4℃保存；臨用前加入5mL 蒸餾水充分溶解混勻，用不完的試劑仍 4℃
保存。

谷氨酸提?。?br />1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣品：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞
數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL
試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30
次）；8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組
織，加入1mL 試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液樣品：按照血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液體積（mL）：試劑一體積
(mL)為1：5~10 的比例（建議取0.1mL 血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液加入1mL 試劑一），進(jìn)
行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至570nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 在有蓋EP 管中加入下列試劑：

試劑名稱（μL） 測定管 對(duì)照管
樣本 250
試劑一 250
試劑二 50 50
混勻，90℃水浴20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，取200uL 至微量石英比色皿
或96 孔板中，于570nm 波長處記錄吸光值A(chǔ)?！鰽=A 測定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一
管。

注意事項(xiàng)：
為提高檢測靈敏度，測定管的吸光值應(yīng)小于1，若大于1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適
當(dāng)倍數(shù)后測定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。