Rosetta 感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

               Rosetta Chemically Competent Cell 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

 

產(chǎn)品規(guī)格

Rosetta：                               10×100μl

pUC19（control vector）：10pg/μl               10μl

保存條件：-80℃

 

 

基因型

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-)gal dcm(DE3) pRARE(argU，argW，ileX，glyT，leuW，proL)(Cam^R)

 

 

產(chǎn)品說(shuō)明

 Rosetta 感受態(tài)細(xì)胞具有抗性，補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA， AGG， AGA， CUA，CCC， GGA) 對(duì)應(yīng)的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平，該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)（DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶），經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)10⁸cfu/μg。

 

 

操作方法

1. 取100μl冰上融化的Rosetta感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

 

 

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。