抗體保存指南

【資料簡(jiǎn)介】

抗體保存指南
抗體保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當(dāng)，大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。 本指南以abcam抗體保存方法為主，同樣也可以應(yīng)用到其他絕大部分抗體產(chǎn)品！ 請(qǐng)謹(jǐn)記！無(wú)論何時(shí)請(qǐng)按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體！ 1. 收到抗體后請(qǐng)務(wù)必在12000rpm離心20-30s后再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存！ Abcam的抗體使用非常特殊的儲(chǔ)存管，只有在12000rpm離心20-30s才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來(lái)。即使是在10000rpm離心也會(huì)導(dǎo)致離心不*，導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象！ 2. 對(duì)于abcam大部分抗體，比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20oC or -80oC 。 對(duì)絕大多數(shù)抗體來(lái)說，保存在-20oC是*足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80oC 會(huì)有更多的好處！  分裝可以zui大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害，同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。  分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好，zui少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小，抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響  復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4oC，避免再凍起來(lái)！  抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，在4oC 盡量不要超過1天。  避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層，而不是門上  3. 大部分抗體收到后4oC短暫保存1-2周對(duì)抗體活性是沒有影響的。 如果抗體很快（1-2周）會(huì)使用，推薦在4oC保存，這是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害。如果要長(zhǎng)期保存則是在-20oC or -80oC。zui關(guān)鍵的一點(diǎn)是要根據(jù)說明書推薦的方式來(lái)正確的保存抗體！ 但是，腹水形式的產(chǎn)品請(qǐng)?jiān)谑盏胶罅⒓磧銎饋?lái)！因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長(zhǎng)期在4oC保存會(huì)導(dǎo)致抗體的降解！ 4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過程需要1-2周的時(shí)間，所以是在4oC的條件下來(lái)完成的。    4oC運(yùn)輸zui主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害（如果使用干冰運(yùn)輸，那么收到時(shí)抗體是凍起來(lái)的，為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程）。所以運(yùn)輸過程中避免干冰運(yùn)輸！ 特殊抗體的保存條件：  酶聯(lián)抗體：永遠(yuǎn)保存在4oC，避免凍起來(lái)。否則會(huì)導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失  偶聯(lián)抗體：所有偶聯(lián)抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體，對(duì)光極為敏感，因此在所有的實(shí)驗(yàn)階段也是要避光操作的！  IgG3的同型對(duì)照：永遠(yuǎn)保存在4oC，避免凍起來(lái)。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過程，該抗體非常容易形成多聚體    無(wú)論是保存還是運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融！  反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力！ 抗體保存其它相關(guān)信息：  關(guān)于加入甘油保存：  有些人會(huì)加50%的甘油到抗體中來(lái)避免反復(fù)凍融，甘油在-20oC 會(huì)降低冰點(diǎn)。這對(duì)很多抗體可能是可行的。但是abcam僅對(duì)非常小的一部分抗體檢測(cè)過其在這種條件下的穩(wěn)定性；而abcam只對(duì)按照推薦條件保存的抗體提供質(zhì)量保證！加入甘油的溶液不建議在-80oC保存，因?yàn)檫@已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn)。如果您要加入甘油來(lái)保存抗體的話，請(qǐng)謹(jǐn)慎注意無(wú)菌操作，避免污染！ 關(guān)于蛋白保護(hù)劑：  蛋白在高濃度時(shí)更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），這就是為什么在抗體中加入BSA之類作為穩(wěn)定劑的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來(lái)標(biāo)記的話，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑，因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合標(biāo)記物。 關(guān)于*（sodium azide）的使用：  為了防止微生物污染，*經(jīng)常被加入到抗體中（終濃度0.02% （w/v））。Abcam的很多抗體已經(jīng)含有了0.02％-0.05%的*，在說明書的“Storage buffer”中有標(biāo)明的。 在下述情況中不能使用*： 如果抗體用于染色或處理活細(xì)胞，用于體內(nèi)研究：  *在抵抗微生物的同時(shí)，對(duì)其它大部分有機(jī)物也是有毒的，因?yàn)樗钄嗔司€粒體的cytochrome electron transport system. 要偶聯(lián)帶有氨基基團(tuán)的抗體：  *會(huì)干擾任何含有氨基基團(tuán)的偶聯(lián)，因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前，應(yīng)將*去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入*保存，但是濃度只能是0.01％。對(duì)于需要偶聯(lián)的抗體，thimerosal （merthiolate）可以替代*作為保護(hù)劑！ 注：*的去除方式：  可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除！IgG的分子量是150kDa （IgM 是~ 600kDa）; *的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的濾膜即可將*從抗體中去除。

用相應(yīng)的稀釋液稀釋，里面的保護(hù)蛋白和防腐劑會(huì)使保存效果好一些，另外不要凍融，不小心凍上問題也不大，用酶標(biāo)稀釋液稀釋的酶或用小牛血清＋防腐劑稀釋的抗血清4°保存半年沒有問題。