非洲豬瘟試劑盒說明書

【資料簡介】

核酸DNA提取試劑盒（柱膜法）使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：病毒DNA提取試劑盒

英文名稱：Extraction Kit for Virus DNA

【預(yù)期用途】

本試劑盒主要用于疑似病毒等病原感染抗凝血、血淸、拭子、組織、飼料及環(huán)境中的病毒DNA的提取，純化的核酸可適用于各種常規(guī)操作及PCR試驗(yàn)。

【試劑盒組分】

I、試劑盒組成及貯藏條件

名稱	20 T	50 T
1、吸附柱	20個	50個
2、收集管	20個	50個
3、裂解液	5 mL	11 mL
4、洗液I	13 mL	32 mL
5,洗液II	13 mL	32 mL
6.洗脫液	1.2 mL	3 mL

2、 保存條件及有效期：室溫下保存，有效期12個月.

3、 需自備材料：無水乙醇、1.5 mL無菌離心管、1.5 mL無菌離心管（長臂型）、生理鹽水、研缽、無菌

1mL, 2OOuL、10uL槍頭、記號筆等。

【操作步驟】

一、樣品制備

1、 血液樣品：抗凝血樣品置離心管中，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，取上層血漿；非抗凝血樣品置離心 管中，待凝固后，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，取上層血清，置于滅菌離心管中，編號待檢。

2、 組織樣品：采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品0.1g.組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨，加入1 mL生理鹽水混勻，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，取上清于滅菌離心骨中，編號待檢。

3、 口腔液：進(jìn)食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉線綁紗布團(tuán)吸引動物咀嚼，收集口腔液大于 500uL， 8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，取上清于滅菌離心管中，編號待檢。

4、 飼料：取適量研磨后的飼料（約0.2g），放入含1 mL生理鹽水或PBS（PH為7.4）緩沖液的2 mL EP 管屮，振蕩混勻，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，取上清于滅菌離心管中,編號待檢.

5、 灰塵：用無菌棉簽蘸取適量環(huán)境表面上的灰塵，放入含1 mL生理鹽水或PBS（PH為7.4）緩沖液的2 mL EP管中，振蕩混勻，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，取上清于滅菌離心管中，編號待檢。

二、DNA的提取

1、取裂解液200uL加入無核酸酶1.5 mL離心曾屮，分別加入血漿/血清/組織液等樣品液200uL. 震蕩混勻10秒或顛倒混勻10次，室溫放置5分鐘（如果室內(nèi)溫度較低時.需放置25C水浴溫育），再加入200uL無水乙醇，顛倒混勻10秒；若樣品渾濁則先12000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘處理，取上清液，以避免堵塞柱子；

2、 將液體轉(zhuǎn)入套有收集管的吸附柱中， 12000rpm離心1分鐘：

3、 棄收集管液體，向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm離心1分鐘;

4、 棄收集管液體，向吸附柱中加600uL洗液II， 12000 rpm離心I分鐘；

5、 棄收集管液體，12000 rpm離心2分鐘，以*去除殘留洗液；

6、將吸附柱轉(zhuǎn)入新的無核酸酸1.5mLEP管（長臂型）中，向柱中央滴加50 uL洗脫液，靜置1分鐘, 12000 rpm離心1分鐘，EP管中液體即為病毒DNA。

【注意事項(xiàng)】

1、 實(shí)驗(yàn)前諾仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書，嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行.在操作過程中對時間、試劑體積等 粘確控制可以獲得好的結(jié)果。

2, 樣本應(yīng)新鮮采集使用，或低溫運(yùn)輸儲存；

3, 樣本具有潛在感染風(fēng)險，核酸的提取應(yīng)在核酸提取實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜中進(jìn)行。

4、 核酸提取冇關(guān)耗材確保高溫滅菌，提取后核酸盡快進(jìn)入下一步試驗(yàn)或冷凍保存待用。

5, 試劑使用前應(yīng)混合均勻，試劑具有一定腐蝕性，使用時請戴手套、口罩做好防護(hù)。

6. 低溫下裂解液出現(xiàn)結(jié)晶數(shù)屬正?，F(xiàn)象，可在60°C水浴加熱助溶后使用。

7、 實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)及時收集，遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行無害化處理。

僅供獸醫(yī)診斷使用