一種非熒光發(fā)色團BHQ-3 NHS，871240-94-7

【資料簡介】

英文名稱：BHQ-3 NHS

CAS：871240-94-7

外觀：深紫色粉末

分子式：C37H38N7O4+

分子量：644.76

儲存條件：-20°C，避光避濕

結構式：

產品簡介：黑暗猝滅劑?-3染料寡核苷酸修飾。BHQ-3可以位于5或3末端或寡核苷酸的內部。BHQ?-3標記的寡核苷酸用于許多應用，包括用于實時PCR的雙標記熒光探針。該暗猝滅劑具有620-730 nm的強吸收范圍，可對在該范圍內發(fā)出熒光的熒光團（如Quasar?670和Quasar 705染料）進行猝滅。

NHS修飾是合成后與一個伯氨基的共軛，因此是一個附加的需要用氨基修飾。C6或C12氨基可置于5&＃39;或對于3&＃39;端，使用C3或C7氨基，對于內部位置，使用氨基修飾的堿，例如氨基dT C6。基于NHS的產率修飾是使用伯氨基進行的合成后共軛。與可作為酰胺的直接自動化偶聯(lián)改性相比，產率較低。近似各種規(guī)模的產量如下所示。

50 nmol規(guī)模合成的***終產量約為2 nmol。

200 nmol規(guī)模合成的~5 nmol***終產量。

1μmol規(guī)模合成的~16 nmol***終收率

黑洞猝滅劑-1（BHQ-1）被歸類為暗猝滅劑（一種非熒光發(fā)色團），被***使用作為各種熒光共振能量轉移（FRET）DNA檢測探針中的3&＃39;-猝滅部分。這樣的探針主要用于***分析，但也可用于***結構研究（1）。例子包括TaqMan探針（2）、蝎子引物（3）和分子信標（4）。BHQ-1的吸光度為534 nm，有效吸光度范圍為480-580 nm。這是用于與熒光染料配對的猝滅劑，熒光染料在可見光范圍（519-556 nm）的黃綠色到黃色部分發(fā)射。這個染料的發(fā)射光譜與BHQ-1的吸收光譜充分重疊，從而使后者能夠淬滅染料前者熒光***。

在FRET探針中使用暗猝滅器的優(yōu)點是低背景熒光（因此更好）信噪比，（b）更高的動態(tài)范圍，（c）適用于多重分析（由于暗猝滅器沒有二次熒光），以及（d）使用暗猝滅劑易于合成FRET探針（因為暗猝滅劑在低聚物脫保護步驟中抗降解）（5）。

作為***雜交探針檢測系統(tǒng)使用的各種熒光染料和猝滅劑分子的開發(fā)允許開發(fā)幾種不同的實時PCR分析系統(tǒng)，這些系統(tǒng)利用染料猝滅劑雜交探針，僅當它們與目標結合時才產生熒光信號。然而，為了正確設計針對特定目標的分析，重要的是根據分析中使用的雜交探針類型、待檢測的目標數量以及可用于執(zhí)行分析的設備類型，仔細選擇雜交探針的染料和猝滅劑。

1） 選擇能被激發(fā)源和你計劃在實驗中使用的分光光度熱循環(huán)儀的光學元件適當激發(fā)和檢測的熒光染料?；诩す獾募ぐl(fā)源通常在窄波長范圍內（例如，氬離子激光器為500-540 nm）提供激發(fā)，而白光源（例如，鹵鎢燈）和發(fā)光二極管與激發(fā)和發(fā)射濾光片結合可在整個可見范圍（400-700 nm）內激發(fā)熒光團。

2） 對于用一個雜交探針檢測一個目標，建議對染料使用FAM、HEX或TET，因為它們可以在所有分光光度熱循環(huán)儀上檢測到，并且所有三種探針都可以使用磷酰胺（這使得探針的合成簡單且具有***效益）。

3） 對于復合分析，至少需要兩種不同的雜交探針，應選擇吸收和發(fā)射波長分離良好的染料。

4） 對于FRET雜交探針，應選擇光譜高度重疊的熒光染料猝滅劑對。請參閱淬火劑選擇表以選擇適當的淬火劑。

5） 對于基于接觸猝滅的雜交探針（例如，分子信標），任何非熒光猝滅劑都應工作良好。

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