微生物固體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

【資料簡(jiǎn)介】

實(shí)驗(yàn)材料    細(xì)菌
試劑、試劑盒    胰化蛋白胨酵母提取物氯化鈉NaOH
儀器、耗材    培養(yǎng)瓶玻璃棒離心管搖床
實(shí)驗(yàn)步驟    
1.  在3個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)試管中各加人5 ml LB培養(yǎng)液，并標(biāo)上序號(hào)1、2、3。

2.  吸取5 μl 細(xì)菌培養(yǎng)液加入1號(hào)試管中振蕩揺勻。

3.  接著從1號(hào)試管吸5 μl 稀釋液加入 2號(hào)試管振蕩搖勻。

4.  從2號(hào)試管吸5 μl 稀釋液加入3號(hào)試管振蕩搖勻，每次都使用新的吸頭。
 
5.  從每個(gè)試管中分別取100 μl 菌液涂布于LB平皿上，并且做好記號(hào)，待平板干后于 37℃培養(yǎng)。
 
6.  計(jì)算每亳升細(xì)菌細(xì)胞數(shù)：細(xì)菌細(xì)咆?cái)?shù)/ml=10×菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)。

7.  包裹好平板保存于4℃以備進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)用。
實(shí)驗(yàn)材料    細(xì)菌
儀器、耗材    接種環(huán)培養(yǎng)皿
實(shí)驗(yàn)步驟    
一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
 
1.  接種環(huán)
 
（1）滅菌，將接種環(huán)置于本生燈火焰中灼燒直至變紅。
 
（2）冷卻，將接種環(huán)觸碰無(wú)菌瓊脂平板的表面直至其不發(fā)出咝咝聲。

二、實(shí)驗(yàn)步驟 

1.  采用無(wú)菌操作技術(shù)，用接種環(huán)將接種物從平板的一側(cè)開始劃線。
 
2.  重新消毒接種環(huán)，從*劃線處將樣品劃線至平板的其佘部分，重復(fù)劃線直至覆蓋整個(gè)平板。

3.  于37℃培養(yǎng)直至長(zhǎng)出單菌落。
 
4.  如果要從很多的菌液中分離單克隆，可以將平 板分為4、6或8小份，在每個(gè)小份中劃出單克隆。

實(shí)驗(yàn)材料    細(xì)菌
儀器、耗材    涂布棒培養(yǎng)箱培養(yǎng)皿
實(shí)驗(yàn)步驟    
一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
 
1.  涂布棒
 
（1）加熱并彎曲一支直徑4 mm 的玻璃管或巴斯德吸管制備涂布棒。

（2）滅菌，將涂布棒的三角部分浸沒于酒精中，從容器中取出后再通過燈焰，點(diǎn)燃其上的乙醇。
 
（3）待涂布棒上的火焰熄滅后，將其觸碰無(wú)菌瓊脂平板的表面使其冷卻。
 
 
 
二、實(shí)驗(yàn)步驟 

1.  吸取0.05~1 ml 培養(yǎng)物至一只干的平板上。
 
2.  用涂布棒作圓周運(yùn)動(dòng)將培養(yǎng)液涂布均勻，或用涂布棒的邊緣在平板的表面劃光柵圖案 （一系列平行線）然后轉(zhuǎn)動(dòng)平板并與已涂布的平行線成直角重復(fù)涂布。

3.  平板蓋微開至平板*晾干，于37℃培養(yǎng)。