通用ELISA試劑盒的檢測系統(tǒng)

【資料簡介】

    自己也為此苦惱過很長一段時(shí)間，跟著自己技術(shù)水平得進(jìn)步，或多或少地也把握了ELISA試劑盒體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現(xiàn)在做方陣，做通用ELISA試劑盒已是輕車熟路了，以前檢測一種抗體用整整一下戰(zhàn)書還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，一個(gè)工作日基本搞定。可是在新老手操縱過程中老是會(huì)泛起或大或小的題目，本人在剛開始做ELISA時(shí)就面對(duì)良多災(zāi)題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是經(jīng)常做得烏煙瘴氣，好比說花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空缺還低。
    常用封鎖劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價(jià)廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。詳細(xì)的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。但*選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)詳細(xì)來實(shí)踐。應(yīng)留意以下原理：因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，通用ELISA試劑盒大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。還有有的包被原可能不是蛋白，對(duì)于*和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被，親和素*:先親和素先包被載體，加入*化的DNA，這種包被方法平均、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
     包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別，所以保留抗原很重要，我做重組蛋白時(shí)，通用ELISA試劑盒師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。