根據(jù)ELISA基本原理探討其四大種類

【資料簡(jiǎn)介】

直接ELISA是所有ELISA中步驟zui簡(jiǎn)單的一種，其方法是將抗原按一定的比例用包被緩沖液稀釋好包被到固相載體上，包被完成后簡(jiǎn)單洗滌，再加入封閉液，封閉結(jié)束后再次洗滌除去多余封閉液，加入稀釋好的特異性的酶標(biāo)抗體，37℃溫育一小時(shí)或4℃溫育過夜后，洗滌除去多余的抗體，加入底物顯色并判讀結(jié)果。zui后顯色的深淺與加入的酶標(biāo)抗體量成正比。對(duì)于雙抗夾心ELISA，待檢對(duì)象必須包括兩個(gè)或者兩個(gè)以上的表位，否則檢測(cè)抗體無法與待檢抗原結(jié)合，例如半抗原和小分子抗原都是不能用雙抗夾心ELISA檢測(cè)的。對(duì)于雙抗原夾心ELISA，其操作與間接ELISA基本相同，但利用特異性的抗原代替酶標(biāo)二抗，所以特異性比間接法更好。另外，由于間接ELISA中使用的二抗一般只能識(shí)別IgG，而雙抗原夾心ELISA中任何類似的免疫球蛋白都可以被檢測(cè)出，因此雙抗原夾心ELISA比間接ELISA也更靈敏。
    下面我將結(jié)合一些試劑盒舉例說明加拿大human interleukin-8(IL-8),這個(gè)指標(biāo)試劑盒的用到的系統(tǒng)就是這種直接夾心ELISA,在此基礎(chǔ)上發(fā)展了親和素(avidin)*(biotin)系統(tǒng)(system)，以*標(biāo)記的抗體（或抗原）代替原ELISA系統(tǒng)中的酶標(biāo)抗體（抗原），加拿大 human interleukin-1β(IL-1β)，TNF-α，IL-6 均用到此體系。
競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA又叫封閉ELISA，其主要原理是用待檢抗原或抗體去干擾已經(jīng)預(yù)先設(shè)計(jì)好的體系，zui終顯色的結(jié)果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負(fù)相關(guān)。競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA靈活性很強(qiáng)，可以在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)出更復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)方案，從而派生出所謂的直接競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA、間接競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA、夾心競(jìng)爭(zhēng)ELISA等特殊的ELISA方法。這里僅以直接競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA和間接競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA為例簡(jiǎn)單闡述原理。直接競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA中，預(yù)先將抗原包被在固相載體上，并加入酶標(biāo)的特異性抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)，加入待檢抗原（或抗體），如果待檢對(duì)象是抗原，則待檢抗原就與預(yù)先包被在固相載體上的抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)構(gòu)酶標(biāo)抗體；如果待檢測(cè)對(duì)象是抗體，則待檢抗體就與系統(tǒng)中原有的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合包被在固相載體上的抗原。洗滌過程就可以洗掉被競(jìng)爭(zhēng)下的酶標(biāo)抗體，zui后加底物顯色。zui終顯色的結(jié)果與待檢原（或抗體）量成反比。直接競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA的原理如圖5。注意在直接競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA中，同一預(yù)制備的體系既可以測(cè)定抗原，也可以測(cè)定抗體。