人乳酸脫氫酶酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

【資料簡介】

人乳酸脫氫酶酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中乳酸脫氫酶(LDH)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人乳酸脫氫酶(LDH)水平。用純化的人乳酸脫氫酶(LDH)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入乳酸脫氫酶(LDH)，再與HRP標記的人乳酸脫氫酶(LDH)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乳酸脫氫酶(LDH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人乳酸脫氫酶(LDH)濃度。
標本要求   
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
貓腎損傷分子-1（Kim-1）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說明書馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融 
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 
操作步驟 
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。 
120ng/L  5 號標準品  150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液 
60ng/L  4 號標準品  150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液 
30ng/L  3 號標準品  150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液 
15ng/L  2 號標準品  150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液 
7.5ng/L  1 號標準品  150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液 
2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、標準孔、待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。       
4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用 
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。 
6.  加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。   
7.  溫育：操作同3。 
8.  洗滌：操作同5。 
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘. 
10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。 
11.  測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。 
操作程序總結： 
計算 
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式， 將樣品的OD值代入方程式， 計算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。   
人乳酸脫氫酶酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項 
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。 
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內，如標本數(shù)量多，使用排槍加樣。 
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。 
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 
6．底物請避光保存。 
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 
9．本試劑不同批號組分不得混用。 
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 
保存條件及有效期 
1．試劑盒保存： 2-8℃ 
2．人乳酸脫氫酶酶聯(lián)免疫分析試劑盒有效期：6個月