Cell Navigator 線粒體標(biāo)記試劑盒 綠色熒光 是一套熒光成像工具，用于標(biāo)記細胞器細胞器，如膜，溶酶體，線粒體和細胞核等?；罴毎€粒體的選擇性標(biāo)記為研究細胞事件提供了一種強有力的方法。這個特定的試劑盒旨在標(biāo)記藍色熒光的活細胞線粒體。該試劑盒使用專有染料，可根據(jù)線粒體膜電位梯度選擇性累積在線粒體中。線粒體指示劑是一種疏水性化合物，可以很容易地滲透完整的活細胞，并在進入細胞后被困在線粒體中。該熒光線粒體指示劑長時間保留在線粒體中，因為該指示劑攜帶細胞保留組。這一關(guān)鍵特征顯著提高了染色效率。它可以很容易地適用于各種熒光平臺，如微孔板分析，免疫細胞化學(xué)和流式細胞術(shù)。它適用于多種研究，包括細胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。該試劑盒為所有重要組分提供了優(yōu)化的細胞標(biāo)記方案。它適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。Cell Navigator 線粒體標(biāo)記試劑盒 綠色熒光 是美國AAT Bioquest研發(fā)的產(chǎn)品。
適用儀器
| 熒光顯微鏡 | |
| Ex: | FITC 濾波片組 |
| Em： | FITC 濾波片組 |
| 推薦孔板: | 黑色透明底板 |
樣品分析
1.準備線粒體染色溶液：
1.1將所有組件溫度調(diào)至室溫。
1.2通過將20μLMitolite Green（組分A）稀釋到10mL活細胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。
注1：對于一個96孔板，20μL的500X Mitolite Green（組分A）就足夠了。在≤-20oC下等分并儲存未使用的500X Mitolite Green。避光，避免反復(fù)凍融循環(huán)。
注2：熒光線粒體指示劑的濃度根據(jù)具體應(yīng)用而變化。可以根據(jù)特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。
2.準備和染色細胞：
2.1對于粘附細胞：在96孔黑色墻壁/透明底板上或在裝有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上培養(yǎng)細胞。當(dāng)細胞達到所需的匯合時，加入等體積（例如對于96孔板為100μL，對于384孔板為25μL）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養(yǎng)基緩沖液）替換染料上樣溶液。
注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標(biāo)記濃度或孵育時間以使染料積累。
2.2對于懸浮細胞：以1000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預(yù)熱（37℃）生長培養(yǎng)基中輕輕重懸細胞沉淀，并加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養(yǎng)基緩沖液）替換染料上樣溶液。
注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標(biāo)記濃度或培養(yǎng)時間以使染料積累。
注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。
圖1.使用Cell Navigator™線粒體染色試劑盒染色的U2OS細胞圖像* Costar黑色96孔板中的綠色熒光*
