【EPA1623方法的操作簡介】

“EPA1623方法”是由美國國家的用于測定水中隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的標準方法。概況地說，該方法分為三部。，水樣進行過濾收集水中的亂囊和孢囊；第二，利用免疫磁分離來純化過濾樣品；第三，對純化的樣品通過免疫熒光顯微鏡法來監(jiān)測“兩蟲”的數(shù)量。

1、水樣過濾

采用美國EPA推薦的PALL公司Envirochek-HV囊式濾器對水過濾，將卵囊、孢囊及其他無知收集在過濾器上。該過濾器可用于實驗室批量水樣的過濾，也可以用于野外現(xiàn)場水樣的過濾。過濾后的囊式濾器，用洗脫劑將攔截在濾囊上的顆粒物震蕩洗脫下來，并將洗脫物收集在一個250毫升的離心管中。

   Life Sciences

  ◇兩蟲檢測囊式過濾器:水樣過濾采用圖2所示的方法將PALL公司囊式濾器（見圖3）安裝好，過濾器的濾囊用圖4所示的震蕩器進行洗脫分離。

  ◇特點

• EPA1622＆1623方法推薦產(chǎn)品。

• 1um孔徑的改良濾膜能99%截留兩蟲。

• 一次性使用的設(shè)計避免了因其他因素的污染而造成的實驗結(jié)果誤差。

• 專用于源水與自來水的隱孢子蟲與賈第鞭毛蟲的濃縮與回收，使用簡單、方便、快捷。

 2、免疫磁分離  
   離心管中的洗脫物通過離心分離作用，使顆粒物沉淀在離心管底部，同時去掉離心管中的上清液。將離心后的含有卵囊和孢囊的沉淀物用純水混勻，并向其中加入Dynal公司的免疫磁分離試劑（Dynabeads GC-Combo試劑盒）進行磁分離。具體做法是：首先用帶有抗體（抗隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲）的特殊磁珠捕獲沉淀物的卵囊和孢囊；其次通過Dynal公司的MPC-S磁粒濃縮器將捕獲有卵囊和孢囊的磁珠吸附在試管壁上，去掉未被吸附在試管壁上含雜質(zhì)的液體，以達到卵囊和孢囊從沉淀物中分離出來的目的；再次加入鹽酸將管壁上捕獲有卵囊和孢囊的磁珠進行洗滌，以使卵囊和孢囊從磁珠上解離出來；最后將含有卵囊和孢囊的純化液轉(zhuǎn)移至井形載玻片上進行制片。

   ◇隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的純化—免疫磁分離技術(shù):1999年美國在EPA1623方法中規(guī)定利用IMS{Immuo Magnetic Separation}免疫磁分離技術(shù)Dynabeads來分選檢測飲用水中隱孢子蟲卵囊和賈第鞭毛蟲孢囊，其原理是：利用帶有特異性抗體的磁珠與樣品中的目標產(chǎn)物G/C特異性抗原相結(jié)合，在磁場中搞笑選擇中分離。
   3、IFA染色&鏡檢
   待井形載玻片的純化液干后，用NaOH中和井形載玻片上樣品，再用Dynal公司的Aqua-GloTMG/C染色試劑盒，將卵囊和孢囊在井形載玻片上用磁熒光標記的單性抗體和DAPI溶液著色后，蓋上蓋玻片。然后，OLYMPUS熒光和差分干涉相襯（DIC）顯微鏡對著色樣本進行檢測。觀察樣本，對符合卵囊和孢囊大小、外形、熒光特性的對象進行定性、定量分析。
   ◇研究型正置熒光生物顯微鏡系統(tǒng):本實驗中所配置的OLYMPUS正置陽光生物顯微鏡可以很好地完成明場和暗場顯微鏡觀察，具有良好的可靠性、穩(wěn)定性和實驗室廣泛應(yīng)用等特性。顯微鏡數(shù)碼照相部分所配置的數(shù)碼照相機，為專業(yè)應(yīng)用的高清晰度數(shù)碼相機，采用不同于民用的數(shù)碼數(shù)據(jù)采集及系統(tǒng)，此款相機的成像可達到1200萬像素級別，并且在使用明場拍攝的同時可以可靠、穩(wěn)定地完成熒光圖像、暗場等特殊拍攝的要求，對實驗圖像數(shù)據(jù)的記錄、再現(xiàn)和分析提供了很好的可能和保障；該相機的相關(guān)系統(tǒng)是目前應(yīng)用比較普通、性能比較*的；如出現(xiàn)問題也方便維修和更換配件。配備微機及色彩打印系統(tǒng)。

• “EPA1623方法”所需部分產(chǎn)品信息