步驟1. 目標(biāo)基因全基因合成：
從基因庫(kù)中搜索目標(biāo)蛋白的cDNA序列。如果我們的cDNA文庫(kù)中有這個(gè)基因，我們免費(fèi)提供給客戶。
根據(jù)選用的表達(dá)系統(tǒng)對(duì)cDNA進(jìn)行密碼子優(yōu)化，密碼子優(yōu)化。
合成設(shè)計(jì)好的基因序列。
提供給客戶：目標(biāo)基因（在T載體或常規(guī)穿梭載體上）及測(cè)序報(bào)告。
價(jià)格：3.80元/堿基,如果客戶直接提供構(gòu)建好的質(zhì)粒，則免去這部分費(fèi)用．
時(shí)間：2~3周，根據(jù)基因的大小而定.詳見(jiàn)全基因合成服務(wù)
步驟2. 目標(biāo)基因亞克?。?/strong>
擴(kuò)增并抽提含有目標(biāo)基因的載體質(zhì)粒。
將目標(biāo)基因亞克隆到合適的表達(dá)質(zhì)粒上。
測(cè)序驗(yàn)證構(gòu)建質(zhì)粒的準(zhǔn)確性。
閃晶生物免費(fèi)提供如下表達(dá)載體：
提供給客戶：正確構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒，含重組質(zhì)粒的DH5α菌株及測(cè)序報(bào)告。
價(jià)格：免費(fèi)
時(shí)間：1-2周
步驟3. E. coli表達(dá)菌株轉(zhuǎn)化及篩選：
擴(kuò)增并抽提構(gòu)建好的表達(dá)質(zhì)粒。
將表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到高效的E.Coli表達(dá)菌株中。
至少挑選5個(gè)陽(yáng)性克隆于LB培養(yǎng)基中擴(kuò)增并誘導(dǎo)表達(dá)目標(biāo)蛋白。
SDS-PAGE電泳檢測(cè)培養(yǎng)后中目標(biāo)蛋白的表達(dá)情況，并挑選合適的單克隆菌株用于目標(biāo)蛋白的表達(dá)。
可提供表達(dá)菌株：DH5α, , JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
提供給客戶：重組質(zhì)粒的表達(dá)菌株及表達(dá)檢測(cè)報(bào)告。
價(jià)格：免費(fèi)
時(shí)間：1周
步驟4. 目標(biāo)蛋白表達(dá)及純化：
搖瓶培養(yǎng)1L重組細(xì)菌，誘導(dǎo)表達(dá)目標(biāo)蛋白。
通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。
利用蛋白酶去除不需要的純化標(biāo)簽，再純化獲得所需的目標(biāo)蛋白（可選，構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)需加入合適的蛋白酶切位點(diǎn)）。
通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。
提供給客戶：純化好的目標(biāo)蛋白1~5mg及純化報(bào)告。
