For Research Use Only

僅供研究用

貨號：QY-M30506

雞新城疫病毒抗體(NDV Ab)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定雞血清，血漿及相關(guān)液體樣本中新城疫病毒抗體(NDV Ab)的水平。

實驗原理：

本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標(biāo)本中雞新城疫病毒抗體(NDV Ab)。用純化的雞新城疫病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中雞新城疫病毒抗體(NDV Ab)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的雞新城疫病毒抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中雞新城疫病毒抗體(NDV Ab)的存在與否。

操作步驟：

1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

3.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

4. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

5. 配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml 后備用

6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑 B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘

8. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

結(jié)果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;

陰性對照平均值≤0.15 臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.20

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為雞新城疫病毒陰性陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為雞新城疫病毒陽性

注意事項

1. 操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。

2. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5. 底物請避光保存。

6. 試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm

7. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須注意安全。