For Research Use Only
僅供研究用
貨號(hào)：QY-H10979

人抑制素B（INHB）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑僅供研究使用    目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中抑制素 B（INHB）的含量。
人抑制素B（INHB）酶聯(lián)免疫分析（實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人抑制素 B（INHB）水平。用純化的人抑制素 B
（INHB）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入抑制素 B（INHB），再與 HRP 標(biāo)記的抑制素 B（INHB）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抑制素 B（INHB）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人抑制素 B（INHB）濃度。
人抑制素B（INHB）酶聯(lián)免疫分析（試劑盒組成：
說(shuō)明書(shū)、封板膜、密封袋、酶標(biāo)包被板、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、酶標(biāo)試劑、樣品稀釋液、顯色劑、顯色劑 、終止液、濃縮洗滌液。
人抑制素B（INHB）樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/ 分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬(wàn)/ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

（操作步驟：
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl，然后在、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻；然后從孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl， 混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl， 濃度分別為 36ng/L，24ng/L  ，12ng/L，6ng/L， 3ng/L）。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
4.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
5.配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。
7.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘.
8.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
9.測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
試劑盒注意事項(xiàng)：
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間盡量控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。