丙酮酸脫氫酶(PDH)測試盒_三羧酸循環(huán)系列
測定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
PDH（EC 1.2.4.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是丙酮酸脫氫酶復合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶，催化丙酮酸脫梭生成-TPP，把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。
丙酮酸脫氫酶(PDH)測試盒_三羧酸循環(huán)系列
測定原理：
PDH催化丙酮酸脫氫，同時還原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），從而導致600nm光吸收的減少。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：50mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：10mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：1mL×1支，-20℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，4℃保存；
試劑六：粉劑×1支，4℃保存；
試劑七：粉劑×1支，4℃保存；
試劑八：粉劑×1支，4℃保存;
工作液的配制：臨用前把試劑五、試劑六、試劑七和試劑八轉移到試劑四中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、稱取約0.1g組織或收集500萬細菌或細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g，4℃離心5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的PDH（此步可選做）。
5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體PDH活性測定。
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至605nm處，蒸餾水調零。
2、工作液于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）中孵育5min。
3、在1mL玻璃比色皿中加入50μL樣本和900μL工作液，混勻，立即記錄605nm處初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
環(huán)保在線