三羧酸循環(huán)系列_乙酰CoA測試盒
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
乙酰CoA廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。是生物體能源物質代謝過程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)能源物質代謝中是一個樞紐性的物質。糖、脂肪、蛋白質三大營養(yǎng)物質通過乙酰CoA匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化，經(jīng)過這條通路*氧化生成二氧化碳和水，釋放能量用于ATP合成。此外，乙酰CoA是合成脂肪酸，酮體及其衍生物等生理活性物質的前體物質。
三羧酸循環(huán)系列_乙酰CoA測試盒
測定原理：
蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰CoA和草酰乙酸生成檸檬酸和CoA。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應，乙酰CoA含量和NADH的生成速率成正比，340nm下吸光值的上升速率反應了乙酰CoA含量的高低。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存。臨用前加入250μL試劑五充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑三：液體10uL×1支，4℃保存。臨用前加入250μL試劑五充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存。臨用前加入22.5mL試劑五充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑五：液體30mL×1瓶，4℃保存。
工作液的配制：臨用前請根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×0.23 m L），將試劑二、三和四按照1:1:90的比例混合，或者直接把試劑二和試劑三加入到試劑四中混勻（可以測定96樣）；加樣前置37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴鍋中預熱30 min；現(xiàn)配現(xiàn)用；
乙酰CoA的提?。?br/>
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min，用蒸餾水于340nm處調(diào)零。
2、將工作液置37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴鍋中預熱10 min。
2、取25μL樣本和230μL工作液至微量石英比色皿或者96孔板，混勻，立即記錄340nm處20s的吸光值A1和80s時的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
環(huán)保在線