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中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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丙二醛(MDA)測(cè)試盒說(shuō)明書

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丙二醛(MDA)測(cè)試盒說(shuō)明書
本試劑盒是在國(guó)內(nèi)外眾多測(cè)試方法的基礎(chǔ)上改進(jìn)的一種微量、快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、對(duì)操作
人員健康無(wú)損害的測(cè)試方法。通過測(cè)試可反映出血清(漿)、乳汁等細(xì)胞外液、紅細(xì)胞、白細(xì)
胞、培養(yǎng)細(xì)胞以及各種動(dòng)植物的細(xì)胞水平及亞細(xì)胞水平的脂質(zhì)過氧化物的量。
一、測(cè)定意義:
機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基,后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸
(polyunsaturated fatty acid,PUFA),引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用,并因此形成脂質(zhì)過氧化物。
如:醛基(丙二醛 MDA)、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或內(nèi)過氧基,以及新的氧自由基等。脂
質(zhì)過氧化作用不僅把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑,即非自由基性的脂類分解產(chǎn)物,而且通過鏈?zhǔn)?br />或鏈?zhǔn)街ф湻磻?yīng),放大活性氧的作用。因此,初始的一個(gè)活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形
成,這些分解產(chǎn)物中,一些是無(wú)害的,另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障礙,甚至死亡。氧自
由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸(PUFA)的過氧化引起細(xì)胞損傷,而且還能通過脂氫過
氧化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。因而測(cè)試 MDA 的量常??煞从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,間
接地反映出細(xì)胞損傷的程度。
MDA 的測(cè)定常常與 SOD 的測(cè)定相互配合,SOD 活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的
能力,而 MDA 的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度,通過 SOD 與 MDA 的結(jié)果
分析有助于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理及工農(nóng)業(yè)生物試劑的發(fā)展。
二、測(cè)試原理:
過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛 (MDA)可與硫代酸 縮合,形成紅色產(chǎn)物,
在 532nm 處有大吸收峰。因底物為硫代酸(Thibabituric Acid TBA)所以此法稱 TBA
法。

) (TBA
三、 測(cè)試所需儀器設(shè)備:
可見光分光光度計(jì),可調(diào)到 95℃左右的恒溫水浴箱或沸水鍋,離心機(jī)。
四、試劑盒組成與配制(100T/96 樣):
試劑一:液體 20ml×1 瓶,室溫保存。(天冷時(shí)會(huì)凝固,每次測(cè)試前適當(dāng)水浴加溫以加速溶解,
直至透明方可應(yīng)用)。
試劑二:液體 12ml×1 瓶,用時(shí)每瓶加 340ml 雙蒸水混勻,4℃冷藏(注意不要碰到皮膚上)。
試劑三:粉劑×1 支,用時(shí)將粉劑加入到 90℃~100℃的熱雙蒸水 60ml 中,(在溶解過程中可
適當(dāng)加熱),充分溶解后用雙蒸水補(bǔ)足至 60ml 再加冰醋酸 60ml,混勻,配好的試劑
避光冷藏。(冰醋酸自備)
標(biāo)準(zhǔn)品:10nmol/ml 四乙氧基丙烷 5ml×1 瓶,4℃冷藏。
[注]:冰醋酸(分析純,乙酸濃度≥99.5%);測(cè)試盒冷藏至少可保存一年。
五、試劑盒組成與配制(50T/48 樣):
試劑一:液體 10ml×1 瓶,室溫保存。(天冷時(shí)會(huì)凝固,每次測(cè)試前適當(dāng)水浴加溫以加速溶解,
直至透明方可應(yīng)用)。
試劑二:液體 6ml×1 瓶,用時(shí)加 170ml 雙蒸水混勻,4℃冷藏。(注意不要碰到皮膚上)。
試劑三:粉劑×1 支,用時(shí)將粉劑加入到 90℃~100℃的熱雙蒸水 30ml 中,(在溶解過程中可
適當(dāng)加熱),充分溶解后用雙蒸水補(bǔ)足至 30ml 再加冰醋酸 30ml,混勻,配好的
試劑避光冷藏。(冰醋酸自備)
標(biāo)準(zhǔn)品:10nmol/ml 四乙氧基丙烷 5ml×1 瓶,4℃冷藏。

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