精子快速染色液

(Quick Sperm Stain)

[儲(chǔ)存條件及有效期]

本試劑盒應(yīng)置室溫密封保存，有效期一年。

[樣本制片前處理]

涂片的制備:為達(dá)到良好染色效果，不同性狀精液標(biāo)本的涂片方式有所區(qū)別，可根據(jù)具體情況選擇下列涂片方法。

1、低粘度精液(“拉薄"技術(shù): 滴一小滴(5-10ul) 新鮮液化精液于清潔載玻片上，將推玻片保持與載玻片 30 度角，置于精液正前方，稍往后移與精液液滴接觸，即可見精液液滴沿推片下緣散開，再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向前滑動(dòng)，制成適當(dāng)厚度涂片。若精子密度>20X10°/ml，取 5ul 量精液涂片: 若精子密度<20X10°ml，取 10-20ul 量精液涂片。

2、高粘稠度精液或低精子密度或充滿碎屑精液: 稀釋精漿或離心去精漿。取 0.2-0.5ml 精液加 10ml 生理鹽水，800g 離心 10 分鐘，去掉上清液，用生理鹽水調(diào)節(jié)精子密度至(40-70)X10°/m1 左右，充分混勻。再取 5-10u1 懸浮液于清潔載玻片上，將推玻片保持與載玻片 30 度角，置于精液正前方，稍往后移與精液液滴接觸，即可見精液液滴沿推片下緣散開，再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向前滑動(dòng)，使此滴精液在載玻片上充分展開。然后在 10X40 倍光徑下掃視載玻片，以確保精液涂片均勻: 10X40 倍鏡下每視野至少有 40 個(gè)精子，并且沒有精子成團(tuán)或重疊。

操作步驟

1、精液懸液涂片制備完成后，水平放置，空氣中自然干燥

2、用 95%乙醇固定 2~3 分鐘，空氣中自然晾干。 干透后水合 1~2 分鐘

3、試劑一核染液染色 30 秒~2 分鐘，流水洗凈

4、試劑二漿染液染色 20 秒~2 分鐘，不要倒丟，立即滴加增色液混合作用 5 秒左右，再用試劑三增色液沖洗一遍，濾紙吸干。

5、顯微鏡油鏡下鏡檢觀察。

鏡檢結(jié)果

1、精子頂體區(qū)染成淡紫色，頂體后區(qū)染成深紫色，精子體部及尾區(qū)染成淡紅色。

2、世界衛(wèi)生組織(WHO) 精子缺陷型分類如下:

3、多重精子缺陷指數(shù)的計(jì)算

WHO 推薦以下列參數(shù)評(píng)價(jià)精子形態(tài)異常: 畸形精子指數(shù)(teratozoospermia index,TZI)或多種異常指數(shù)(multiple anomalies index,MAI),即用缺陷總數(shù)除以畸形精子數(shù)目，以及用精子畸形指數(shù)(sperm deformity index,SDI)，即缺陷總數(shù)除以精子總數(shù)。這些參數(shù)預(yù)示精子在體內(nèi)和體外的功能情況。

計(jì)數(shù)方法:染色標(biāo)本結(jié)果觀察時(shí)，分別記錄“正常"、“頭部缺陷"、“中段缺陷"和“尾部缺陷"精子數(shù)。如果一個(gè)精子同時(shí)有頭、中段、及尾部缺陷，應(yīng)同時(shí)記錄這三種缺陷，這三種缺陷分別記錄在相應(yīng)的分類中，而這個(gè)精子只作為一個(gè)細(xì)胞數(shù)被計(jì)數(shù)。至少計(jì)數(shù) 200 個(gè)精子。

計(jì)算方法示例:

計(jì)數(shù)和精子數(shù):200

正常精子數(shù):78

正常精子百分比: (78/200X )39%

缺陷精子數(shù): (200-78)122 (61%)

頭部缺陷精子數(shù):110 (55%)

中段缺陷精子數(shù):18 (9%)

尾部缺陷精子數(shù):16 (8%)

缺陷總數(shù): (110+18+16)144

畸形精子指數(shù)(TZI) =(缺陷總數(shù)/缺陷精子數(shù)) =144/122=1.18

精子畸形指數(shù) (SDI) =(缺陷總數(shù)/所數(shù)精子總數(shù))=144/200=0.72

畸形精子指數(shù)(TZI) 的數(shù)值介于 1.00 (每異常精子只有一種缺陷) 和 3.00 (每個(gè)異常精子都有頭、中段和尾部缺陷) 之間。

有研究表明，TZ>1.6 與未經(jīng)治療不育夫婦的低生育率有關(guān)，而且 SDI1.6 是體外受精失敗的閱值。

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