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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>今日課堂:小細(xì)胞之大微妙
1.收到細(xì)胞,時(shí)間要鏡檢:調(diào)查細(xì)胞形態(tài)是否正常,關(guān)于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁狀況是否很好,調(diào)查細(xì)胞密度,有疑議及時(shí)咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。因?yàn)檫\(yùn)送的時(shí)間或許溫度的變化,許多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里成長(zhǎng)的狀況平和時(shí)會(huì)有點(diǎn)不一樣,主要是貼壁結(jié)實(shí)問題。
2.當(dāng)通過上一步的調(diào)查,細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時(shí),進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密到達(dá)80%左右時(shí),則處理如下:棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的慣例培養(yǎng)基;或替換新鮮的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中,隨后每天調(diào)查。細(xì)胞在低于正常成長(zhǎng)溫度狀況下,會(huì)調(diào)整為停止期,或許慢速成長(zhǎng)期,必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個(gè)小時(shí)左右,才干重新調(diào)整到接近對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的狀況,在對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期進(jìn)行細(xì)胞的傳代會(huì)大大添加傳代的成功率,和細(xì)胞的存活率。
3.如果經(jīng)步調(diào)查發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超越90%,而且細(xì)胞狀況很好時(shí),則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需求立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。關(guān)于成長(zhǎng)比較快,狀況安穩(wěn),不易受外界影響的細(xì)胞可以一次多傳幾瓶。
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