染色體畸變是基因突變的一種形式，通常后果比較嚴(yán)重?？捎猛庵苎馨图?xì)胞，或人和哺乳動(dòng)物體細(xì)胞系作為材料進(jìn)行檢測(cè)，常用的體細(xì)胞系有中國(guó)地鼠卵巢細(xì)胞(CHO)，中國(guó)地鼠肺成纖維細(xì)胞(V79和CHL)，人胚肺2倍體成纖維細(xì)胞等。

一、實(shí)驗(yàn)原理

    外周血中小淋巴細(xì)胞幾乎都處在細(xì)胞增殖周期的G。期或G。期(不同于體外培養(yǎng)的體細(xì)胞)。一般條件下是不會(huì)再分裂的。當(dāng)在培養(yǎng)物中加入適量的植物血凝素(phytohernagglu—tinin，PHA)，37℃培養(yǎng)52～72h后，淋巴細(xì)胞開(kāi)始轉(zhuǎn)化，進(jìn)入細(xì)胞增殖周期，此時(shí)可獲得大量的有絲分裂細(xì)胞。再經(jīng)過(guò)秋水仙素處理，低滲、固定，即可在顯微鏡下觀察到良好的中期染色體分裂象。電離輻射，化學(xué)有害物質(zhì)作用于機(jī)體或體外細(xì)胞，均可引起細(xì)胞染色體的損傷，且損傷與劑量(濃度)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

二、材料與方法

(一)實(shí)驗(yàn)材料

1．受試材料：外周血淋巴細(xì)胞。

2．RPMI 1640培養(yǎng)液，含20％小牛血清。

3．肝素：用生理鹽水配成500U／ml，4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

4．秋水仙素：用0．85％生理鹽水配成40μg／ml濃度，過(guò)濾后4℃冰箱保存。

5．促細(xì)胞分裂劑：植物血凝素(PHA)。

6．KCl低滲液：配制75mmol／L KCl水溶液。

7．固定液(甲醇：冰醋酸=3：1)。

(二)實(shí)驗(yàn)方法

1．受試物的處理實(shí)驗(yàn)分組，至少設(shè)立五個(gè)組，即陽(yáng)性對(duì)照、陰性(溶劑)對(duì)照及三個(gè)劑量組。zui高劑量和zui低劑量之間相差10倍，中間再設(shè)一個(gè)劑量，陽(yáng)性對(duì)照物為已知的染色體斷裂劑，如C(mitomycin c，MMC)，劑量為o．02μg／ml；毒素Bl，濃度為10-6 M等。每組中應(yīng)設(shè)2～3個(gè)平行樣品。

2．外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)培養(yǎng)。

3．收集細(xì)胞經(jīng)受試驗(yàn)處理的細(xì)胞，培養(yǎng)開(kāi)始后52～72h收集細(xì)胞。依不同受試物收集時(shí)問(wèn)有所差異。

4．加入秋水仙素培養(yǎng)終止前4h于培養(yǎng)物中加入40μg／ml秋水仙素，終濃度為0．4～0.8μg／ml，37℃培養(yǎng)。

5．制片。

6．染色用(}iem∞染液染色15min，用自來(lái)水輕輕沖洗殘留染液，待干。

7．鏡檢先在低倍鏡下尋找分散良好的分裂象細(xì)胞，然后用高倍鏡觀察，進(jìn)行染色體畸變計(jì)數(shù)，分析，分別記錄染色體畸變細(xì)胞數(shù)及各種類(lèi)型染色體畸變細(xì)胞數(shù)，選擇良好的典型的染色體畸變圖進(jìn)行顯微照相。

三、結(jié)果分析

1．染色體總畸變率及畸變率

總畸變率(％)=各種畸變類(lèi)型數(shù)／分析細(xì)胞總數(shù)×100

畸變率(％)=染色體畸變數(shù)／染色體總數(shù)×100

2．畸變類(lèi)型分析包括斷片(F)、雙著絲粒(D)、環(huán)(R)、互換(E)等，電離輻射常見(jiàn)斷片、雙著絲粒、環(huán)等，而化學(xué)毒物常見(jiàn)單體斷裂。