DAB 顯色時(shí)間如何把握？
 
1.DAB 顯色時(shí)間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間，到出現(xiàn)淺棕色本底時(shí)即可沖洗。
 
2.DAB 顯色時(shí)間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長，需要下調(diào)抗體濃度或縮短抗體孵育時(shí)間。
 
3.若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深，還有可能是你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時(shí)間。
 
4.DAB 顯色時(shí)間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時(shí)間過短（一抗 4oC 過夜）；另一方面就是封閉時(shí)間過長。
 
免疫組化結(jié)果如何分析？
 
1.陽性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法。在 40 * 光鏡下，隨機(jī)選擇不重疊的 10 個(gè)視野，人工或機(jī)器計(jì)數(shù)陽性著色細(xì)胞，每組 3-6 張不同動(dòng)物組織切片，然后進(jìn)行組間比較即可。
 
2.灰密度分析法。通過在不同組別和不同動(dòng)物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用 image j 進(jìn)行灰密度分析，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析即可。
 
3.評(píng)分法。通過在光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片分別按染色程度（0-3 分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽性范圍進(jìn)行評(píng)分（1-4 分為 0-25%、26-50%、51-75%、76-100%），zui終可以分?jǐn)?shù)相加，再進(jìn)行比較。
 
對(duì)于以上這幾種方法，各有利弊，請細(xì)心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。