(1)無毒和無菌

    無毒和無菌是體外培養(yǎng)細胞的首要環(huán)境條件。細胞在活體內(nèi)，偶爾有細菌或有害物質(zhì)入侵，因體內(nèi)有強大的解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)，可將其解毒或清除，而不易受損害。但在離體的環(huán)境中，失去了防御系統(tǒng)，一旦有害物質(zhì)入侵或細菌污染，可導(dǎo)致細胞死亡，前功盡棄。如培養(yǎng)瓶皿、支持物、培養(yǎng)基、瓶蓋、瓶塞上若有細胞毒性，在培養(yǎng)過程中可導(dǎo)致細胞死亡。因此，在選用這些器皿、材料時要注意，若這些物品消毒不*，帶菌或操作過程不小心使細胞污染，也會導(dǎo)致細胞死亡。若出現(xiàn)交叉污染，可使實驗室原來的細胞系失去原有特性，應(yīng)引起足夠的重視。

(2)輻射線和超聲波

1．可見光可見光的波長是390～780nm。可見光的各種有色光能引起細胞蛻變，延長核分裂的問期，還可顯著降低細胞的附壁能力。因此，體外培養(yǎng)細胞應(yīng)避免日光直接照射，在黑暗中進行培養(yǎng)或短期存放。

2．紫外線弱紫外線下耐受能力強的細胞變化不大，但對敏感的細胞有損害。紫外線強時，新分離的細胞顯示：不能進行*的有絲分裂；在有絲分裂時增加了脫水收縮；在有絲分裂時細胞質(zhì)的起泡減少。Elrlich腹水癌細胞經(jīng)紫外線照射后，用飛點紫外線顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)被照射表面形成水泡，隨后細胞膨脹，損害也漸變嚴重。

3．放射線X射線對細胞有明顯損傷。β射線可影響細胞核的分裂。γ射線使核分裂數(shù)減少并出現(xiàn)不正常的核分裂，可使細胞死亡。

4．超聲波和振動在超聲波振動下，細胞很快會破裂，開始是胞質(zhì)發(fā)生紊亂的流動，原生質(zhì)膠體結(jié)核也有明顯變化，若停止超聲波振動可回復(fù)。細胞致死的原因是由于產(chǎn)生空化作用所致。當超聲波在2．5w／cm2時，細胞受損，染色體發(fā)生畸變，首先發(fā)生畸變的是核染色體。

(3)細胞接種濃度(密度)

    在體外培養(yǎng)細胞中，細胞接種數(shù)對細胞的生長有影響，適宜的接種密度，可以促使細胞增殖，接種密度太低或太高都不利于細胞的生長增殖。如果培養(yǎng)液與細胞的容積比例大于2000：1，生長物質(zhì)彌散到細胞外的比例將是細胞內(nèi)達到低于zui小限度的濃度，此時細胞不能再增殖，培養(yǎng)液中的pH變堿，抑制細胞生長，細胞變圓不能貼壁，甚至引起細胞死亡等。如果接種密度太高，每個細胞周圍培養(yǎng)液的容積降至O．007mm3以下，由于彌散率的降低，細胞內(nèi)生物質(zhì)的濃度增加，容易使排除物或其他代謝產(chǎn)物達到飽和，能量來源也很快耗盡．因此也會妨礙細胞的增殖。

    如何選擇適宜的接種濃度要根據(jù)細胞的代謝和生長繁殖速度以及工作的需要而確定。一般來說，細胞代謝旺盛、生長速度快的細胞如腫瘤細胞，接種濃度宦偏低；而正常組織細胞生長較慢，代謝不夠旺盛，接種濃度可偏高；如果是為了保種或不需急用，接種濃度可偏低些；有時為了便于觀察細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，接種濃度也可適當降低。

(4)容器轉(zhuǎn)動速度和懸浮攪動速度

    有時為了研究的需要而將培養(yǎng)細胞在容器中進行旋轉(zhuǎn)或攪動，如貼壁細胞在旋轉(zhuǎn)管中培養(yǎng)，使轉(zhuǎn)鼓的轉(zhuǎn)速提高，細胞增殖率隨之提高。其原因可能是轉(zhuǎn)動使足夠的營養(yǎng)流動和較充分的氧化作用之故。

    當懸浮攪拌培養(yǎng)細胞時，攪拌速度既不能太快，也不能太慢。如太慢，細胞易結(jié)團、下沉和貼壁，不利于細胞在懸浮狀態(tài)下增殖。如果太快．容易起泡沫，細胞易窒息致死，同時，強烈地攪動易使細胞因機械損傷而破裂。所以選擇適宜的攪拌速度很重要。如BHK2l的攪拌速度適宜為460～330r／min；淋巴細胞(Raji)株，在200r／min和400r／min時細胞致不增不減，或稍有下降，而攪拌速度增加到600r／min時出現(xiàn)生長；類淋巴細胞(Namal—va)生長速度快，在80～100r／min時既不結(jié)團，又不需加抗泡沫劑，且細胞生長仍然很快。各種細胞的適宜攪拌速度不一致，通常與細胞的特性和質(zhì)量有關(guān)，予以注意。