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南京信帆生物技術有限公司
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南京信帆生物:循環(huán)腫瘤細胞富集和分析的工具盤點

時間:2016/4/7閱讀:1125
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新一代測序*Illumina宣布將拓展到醫(yī)學診斷領域。這家公司表示,它已組建了一個名為Grail的公司,希望利用Illumina的測序技術來實現(xiàn)癌癥篩查,直接檢測血液中的循環(huán)核酸。

這樣的檢測有時被稱為“液體活檢(liquid biopsies)”,主要有兩種形式。Grail檢測的是循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)。另外一些人希望通過完整的細胞來診斷疾病和評估預后和療效,這些細胞被稱為循環(huán)腫瘤細胞(CTC)。

CTC就像礦井中的金絲雀,警告著腫瘤的存在和分子特征,而此時疾病可能還沒有癥狀。據(jù)Janssen Diagnostics的研發(fā)主管Ron Mazumder介紹,它們的豐度與病人預后密切相關。“對于轉(zhuǎn)移性乳腺癌、結(jié)腸直腸癌和前列腺癌,你可以根據(jù)CTC的數(shù)量將病人分為預后較好或較差的。”

然而,找到它們談何容易,CTC是極其的。MilliporeSigma(Millipore與Sigma-Aldrich合并而成)的科學家Brian Hall表示:“在1 ml血液中,大約有700萬個白細胞和10個CTC,這真的是大海撈針。”當然,CTC的確切數(shù)量因病人而異,也隨著疾病進程和治療而改變。

為此,研究人員和各家公司設計出幾種策略來幫助你撈針1。

正選和負選

由于CTC如此,大多數(shù)的CTC分析工具都采用兩種基本策略之一。在正選方法中,CTC是利用磁珠偶聯(lián)的抗體來濃縮的,這些抗體針對已知的CTC抗原。例如,Janssen Diagnostics的CellSearch檢測就利用了許多上皮性腫瘤都表達EpCAM的現(xiàn)象來富集CTC,這種檢測已被美國FDA批準。之后用DAPI和細胞角蛋白對分離出的細胞進行染色,以確保它們是CTC,并通過白細胞標志物CD45復染,確定它們不是白細胞。

負選策略則利用抗體來去除那些不是CTC的細胞,例如,表達CD45的。對于某些腫瘤而言,這種策略可能更優(yōu),因為不依賴所表達的CTC抗原。

據(jù)美天旎的腫瘤學研究Olaf Hardt介紹,這兩種策略都不能地回收CTC。細胞聚集成團,因此在負選過程中可能將寶貴的CTC與洗澡水一起倒掉。同理,正選策略也不可避免地會保留一些非CTC。因此,研究人員經(jīng)常將正選與負選相結(jié)合,在下游分析中配對使用,如顯微鏡和流式細胞儀。

當然,這些策略依賴于生物標志物的鑒定,這些標志物定義了感興趣的CTC。并非所有CTC都是EpCAM陽性的,非上皮性腫瘤,如黑色素瘤,就不是。那些經(jīng)歷了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的腫瘤,也不是,賽默飛世爾的腫瘤產(chǎn)品主管Jason Johnson談道。

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