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酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)可以用于:
(1)檢測大分子抗原和特異性抗體等;
(2)具有快速、活絡(luò)、簡便、載體易于標準化等長處。
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶符號。結(jié)合在固相載體外表的抗原或抗體仍堅持其免疫學(xué)活性,酶符號的抗原或抗體既保存其免疫學(xué)活性,又保存酶的活性。
ELISA的樣本搜集與運送:
利用ELISA進行檢驗常見的樣本一般包含血液(指血,靜脈血),尿,糞便,腦脊液,胸腹水,前列腺液,**,**分泌物等,這些樣本搜集的時刻、方法和保存都有一定的要求。
ELISA實驗中的血清需選用血管搜集血液,室溫血液天然凝結(jié)30分鐘,1000xg離心15分鐘左右,搜集上清,分裝后,標好號,-20°C或-80°C保存。運送是用干冰。(注:一個樣本檢測一個目標至少需求40ul血清,您是一個樣本檢測4個目標,至少需求160ul血清,多預(yù)備一些。)
光鏡:肝臟安排4%多聚甲醛固定后密封,4度或許常溫保存即可,運送時用冰袋。
電鏡:一定要是新鮮的安排加到新鮮配置的2.5%戊二醛中固定后,4度保存,電鏡所需的安排塊不需求太大,米粒大小即可,運送時用冰袋即可。
免疫組化:取恰當?shù)陌才欧庞?%的多聚甲醛中固定,密封,避光,四度或常溫保存,運送時加冰袋即可。
RT-PCR和WB:取下肝臟安排,置于-80或許液氮中保存,運送時用泡沫保溫盒加干冰。
留意事項:
血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中或許含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)作聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉積的血清標本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。重復(fù)凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)留意無菌操作,也可參加恰當防腐劑。
按試劑盒說明書的要求預(yù)備實驗中需用的試劑。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水,包含用于洗刷的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計丈量較正。從冰箱中取出的實驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次實驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。
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