qPCR（Quantitative PCR，定量PCR）技術(shù)的誕生無疑是生命科學(xué)研究領(lǐng)域的福音，這種準(zhǔn)確度，靈敏度高的方法解決了不少實(shí)驗(yàn)難題，獲得了大量重要的研究發(fā)現(xiàn)。隨著科學(xué)家們的深入探討，以及新型儀器的出現(xiàn)，這項(xiàng)技術(shù)也獲得了不少創(chuàng)新發(fā)展，一期（10月7日）Science雜志就以“qPCR Innovations and Blueprints”為題，介紹了這方面的新發(fā)展，也推薦了qPCR的實(shí)驗(yàn)操作指南和相關(guān)的新產(chǎn)品。

近年了新qPCR技術(shù)助力微流體（Microfluidics），以及微型化技術(shù)（miniaturization）獲得了不少進(jìn)步，尤其是在單細(xì)胞分析，和數(shù)字PCR這兩方面。

首先可以通過一些系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞qPCR分析，包括用于堅固組織的激光顯微切割系統(tǒng)，或者通過熒光激活細(xì)胞篩選等在懸浮液中捕捉單細(xì)胞。然后是一些類似裂解單細(xì)胞之類的步驟，zui后通過一些新工具來鑒別假陽性和假陰性。

這方面有不少技術(shù)性的文章可以參考，比如“Quantitative analysis of gene expression in a single cell by qPCR”文章，就介紹了作者利用一種重復(fù)通過單個細(xì)胞的cDNA文庫的定量PCR方法來測定單個細(xì)胞內(nèi)多個基因表達(dá)情況的方法。

來自Sigma公司的GenomePlex™ Whole Genome Amplification （WGA）能幫助進(jìn)行這方面相關(guān)的研究分析，WGA能有效而的擴(kuò)增納克級的起始樣本基因組DNA，得到微克級的DNA, 同時zui大程度的避免等位基因的缺失，從而有利于細(xì)胞基因的qPCR分析。據(jù)稱，來自奧斯陸大學(xué)Collas研究組就利用這一產(chǎn)品擴(kuò)增方法, 結(jié)合相應(yīng)的操作程序優(yōu)化, 從1000個細(xì)胞進(jìn)行ChIP處理和芯片分析（ChIP-chip）, 以及進(jìn)行 100 個細(xì)胞的ChIP及其有限相關(guān)基因的qPCR分析 。

另外數(shù)字PCR（digital PCR）也是一項(xiàng)重要的新技術(shù)，說是新技術(shù)，其實(shí)這一技術(shù)已經(jīng)出現(xiàn)一段時間了——早在1997年，Kalinina等就描述了這一方法，之后Vogelstein等在美國PNAS發(fā)表了*篇針對“Digital PCR”的文章。

這項(xiàng)技術(shù)由于采用了這種*的定量方式，其在檢測Copy Number Variation （CNV）方面有很大的優(yōu)勢。Nature Methods上面的一篇文章闡述了對這一技術(shù)的重大改進(jìn)，有效了增加了反應(yīng)槽的數(shù)量，使其密度達(dá)到了普通數(shù)字PCR的100倍。由于反應(yīng)密度的增加，其準(zhǔn)確度也相應(yīng)的增加。這一被稱作百萬像素數(shù)字PCR的技術(shù)的檢測范圍（dynamic range）達(dá)到107，能夠檢測到十萬分之一的突變，以及1%的染色體異常。

來源：生物通