1)實(shí)驗(yàn)器材的使用方法

    為防止消毒物品的再污染，實(shí)驗(yàn)器材必須無(wú)菌操作：細(xì)胞用液瓶的打開(kāi)、吸液、關(guān)閉等一切操作都要在超凈臺(tái)安全區(qū)進(jìn)行。

(1)鹽水瓶瓶塞的使用

    上塞：瓶口消毒，右手拇指、食指塞進(jìn)膠皮內(nèi)，將塞旋入消毒瓶口內(nèi)。瓶口再消毒，瓶直立火焰前方。雙手拇指、中指固定瓶位，雙手食指將膠皮外翻=zui后用消毒紙包裝。

    去塞：瓶口消毒后，用消毒鑷挑開(kāi)膠皮。瓶口再消毒，膠塞旋松取出，瓶順風(fēng)斜放45℃支架。

(2)*瓶瓶塞的使用

    用消毒的臺(tái)鑷取放瓶塞，注意瓶口火焰消毒。貯液瓶塞蓋好，封口膜或膠布密封。

(3)吸管的使用

    取管：右手松夾筒蓋，左手水平抖動(dòng)管筒，管頭端暴露時(shí)取管，筒口消毒套蓋。吸管套吸頭后，火焰上方來(lái)回3次待用。

    注意：粗口徑吸管套前，吸頭先用濕酒精棉球沾濕；飯盒存放的吸管，使用時(shí)將盒蓋開(kāi)一角，用火焰消毒的臺(tái)鑷將遮布掀起一角，吸管頭端暴露，臺(tái)鑷再火焰消毒，將吸管取出，遮布復(fù)原，盒蓋好。

(4)注射器的使用

    安裝：針?biāo)?、針筒消毒后在安全區(qū)套好。臺(tái)鑷消毒將針頭固定，字面在上。針頭放人消毒管內(nèi)待用。

    使用：瓶口消毒去塞，直立火焰前方，針頭插入液面下，左手拿針筒，右手提針?biāo)?，緩慢吸出液體。排氣和多余液體推入酒精棉球內(nèi)。

(5)瓶管、蓋的使用

    蓋的使用要求同塞。需使用同一蓋時(shí)，蓋使用面放在酒精棉球上。套蓋前，蓋使用面火焰消毒。

2)無(wú)菌濾液分裝

①使用正壓濾器時(shí)，采用邊過(guò)濾邊分裝的方法。瓶口的液滴先用微濕酒精棉球吸液，再用干酒精棉球由里向外擦拭，zui后，火焰消毒，加塞包裝。

②使用負(fù)壓濾器時(shí)，借助消毒吸管，將液體移入分裝瓶?jī)?nèi)，瓶口液滴擦拭方法同①。

③血清、酶液少量無(wú)菌液體用吸管分裝，分裝時(shí)注意多換吸管。

3)細(xì)胞用液的分裝要求

①根據(jù)配量準(zhǔn)備分裝瓶和塞。分裝瓶規(guī)格、數(shù)量應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要準(zhǔn)備，這與每次、每周實(shí)驗(yàn)用量、試劑穩(wěn)定性等有關(guān)。避免包裝瓶過(guò)大、貯液時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或細(xì)胞用液反復(fù)凍融使用，造成營(yíng)養(yǎng)成分損失和微生物污染。按一周用量挑選小包裝瓶。融化后的液體置4℃保存。

②實(shí)驗(yàn)前，做好無(wú)菌室、超凈臺(tái)的清潔、消毒工作。實(shí)驗(yàn)用品清點(diǎn)人臺(tái)，超凈臺(tái)啟動(dòng)，紫外線消毒40 min。實(shí)驗(yàn)試劑恢復(fù)室溫后，瓶口、瓶外壁酒精消毒入臺(tái)。臺(tái)面酒精消毒，點(diǎn)火，臺(tái)鑷消毒入酒精瓶。這樣做好了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備。

③分裝前，做好各瓶貯液量標(biāo)記，瓶液量要小于瓶容積的2／3。牛血清等融化后搖勻。方法是：左手掌心托瓶，右手拿瓶口順時(shí)針?lè)较蜉p輕轉(zhuǎn)動(dòng)液體，避免用力過(guò)猛而使液體沾染瓶口和塞。

④抽濾分裝時(shí)，盡量減少無(wú)菌室開(kāi)門(mén)次數(shù)和非操作人員進(jìn)入。嚴(yán)格無(wú)菌操作，盡量縮短試劑在空氣中暴露的時(shí)間。

⑤比較各分裝瓶液體的顏色：將液體顏色過(guò)淺的瓶棄去，此現(xiàn)象與瓶泡酸后沖洗不凈有關(guān)(瓶?jī)?nèi)殘留酸性物質(zhì))。分裝多瓶時(shí)，zui后幾瓶可能出現(xiàn)顏色加深的現(xiàn)象，這是因?yàn)槠靠诔ㄩ_(kāi)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，液體CO2逃逸，pH值上升的緣故。顏色過(guò)深的液體用醋酸調(diào)節(jié)后使用。

⑥各試劑瓶標(biāo)記名稱(chēng)、濃度、配制日期、組號(hào)。細(xì)胞

⑦抽樣(開(kāi)始、中間、zui后瓶)做無(wú)菌試驗(yàn)，37℃培養(yǎng)3 d。