研究T細胞產(chǎn)生的細胞因子的方法

時間：2011-9-19閱讀：720

研究T細胞產(chǎn)生的細胞因子的方法
1）研究細胞因子mRNA的方法
絕大多數(shù)細胞因子mRNA在T細胞中只短暫存在，其存在的量與T細胞產(chǎn)生細胞因子的量也有很好的相關(guān)性。所以，在大多數(shù)情況下，細胞內(nèi)mRNA的量可以反映細胞產(chǎn)生細胞因子的情況。
檢測細胞因子mRNA的試驗主要有：競爭性聚合酶鏈反應、Northern印跡雜交、斑點雜交、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應、原位雜交。
2）研究細胞因子的免疫檢測法
免疫檢測法主要有放射免疫檢測法、酶免疫測定法、免疫熒光測定法和免疫發(fā)光測定法等。
3）研究細胞因子的生物學方法
1．用含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)HT2細胞。取對數(shù)生長期細胞，用細胞培養(yǎng)液洗滌細胞2次，每次離心1000×g 10分鐘。
2．取96孔細胞培養(yǎng)液，每孔加0.1ml含4×103 HT2細胞的細胞培養(yǎng)液。再加0.1ml T細胞培養(yǎng)上清液或經(jīng)系列稀釋的IL-2標準品，每個稀釋度重復3孔。在37℃ 5％ CO2的飽和濕度二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
3．每孔加10μCi（3.7×105Bq）[3H]脫氧胸苷（10μl），在37℃ 5％ CO2的飽和濕度二氧化碳培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4～8小時。
4．用多孔收集器將細胞收集到玻璃纖維濾紙上，在液體閃爍計數(shù)儀中計數(shù)每分鐘放射活性（cpm）。用cpm對稀釋度作圖，根據(jù)標準曲線判定T細胞培養(yǎng)上清液中IL-2的含量。

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