美國(guó)BioAssay Systems一氧化氮（NO)）測(cè)試盒
產(chǎn)品包裝：100T
產(chǎn)品產(chǎn)地：BioAssay Systems

產(chǎn)品說(shuō)明

一氧化氮（NO）是一種活性基團(tuán)，在許多關(guān)鍵的生理功能中發(fā)揮著重要作用。NO 是一氧化氮合成酶氧化精氨酸的產(chǎn)物，參與機(jī)體防御反應(yīng)和生長(zhǎng)發(fā)育、蛋白調(diào)節(jié)及功能性生物分子間的相互作用。  

簡(jiǎn)單、直接、自動(dòng)化的NO濃度檢測(cè)手段在科研及藥物研發(fā)中受到了廣泛應(yīng)用。NO可被氧化生成亞硝酸鹽和硝酸鹽，因此通常測(cè)量NO2-/NO3- 的總濃度作為NO的指標(biāo)。本公司生產(chǎn)的一氧化氮測(cè)試盒采用改良的格里斯法，可準(zhǔn)確測(cè)定硝酸鹽還原成亞硝酸鹽后的NO產(chǎn)物。該檢測(cè)步驟操作簡(jiǎn)單，樣品預(yù)處理和檢測(cè)僅需30分鐘。  

美國(guó)BioAssay Systems一氧化氮（NO)）測(cè)試盒產(chǎn)品特點(diǎn)

敏感、準(zhǔn)確：采用96孔板檢測(cè)，檢測(cè)范圍 0.6 - 200 mM。 

快速、可靠：采用優(yōu)化后的三氯化釩試劑，在60°C將NO3 - 還原成NO2- 只需10分鐘。 

簡(jiǎn)單、高通量：檢測(cè)過(guò)程中只需將樣品與三種試劑混合，在60°C反應(yīng)10分鐘并讀取吸光度。該檢測(cè)方法易于自動(dòng)化，每天可處理數(shù)千份樣品。

適用范圍

直接檢測(cè)：血漿、血清、尿液、組織/細(xì)胞及食品中的NO濃度。

藥物研發(fā)/藥理學(xué)：藥物對(duì)NO代謝的影響。

試劑盒組成（96孔板供100份檢測(cè)）

儲(chǔ)藏條件：試劑盒在室溫下運(yùn)輸。試劑A、試劑B、試劑C和亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液在4°C下保存，其它試劑可在室溫下保存。保質(zhì)期6個(gè)月。

預(yù)防措施：本產(chǎn)品僅供研究用。使用過(guò)程中嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)安全措施。

美國(guó)BioAssay Systems一氧化氮（NO)）測(cè)試盒檢測(cè)步驟

樣品處理：組織或細(xì)胞樣品用1 x PBS 溶液（pH 7.4）均漿。在4℃下以10,000g或更高的轉(zhuǎn)速離心。取上清液用于NO 檢測(cè)。 

血清、血漿、全血、含F(xiàn)BS的細(xì)胞培養(yǎng)液、組織或細(xì)胞提取物, 需進(jìn)行脫蛋白處理。尿液和唾液無(wú)需脫蛋白處理。

脫蛋白處理: 在1.5mL離心管中加入150 mL樣品和8 mL ZnSO4混勻，然后加8 mL NaOH，再次混勻。在14,000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘。轉(zhuǎn)移100mL上清液到干凈的管中。注意：脫蛋白處理時(shí)，若平行將150 mL標(biāo)準(zhǔn)液同樣用ZnSO4 和 NaOH處理，則不需要再計(jì)算稀釋因子。

96孔板測(cè)定步驟 

1. 標(biāo)準(zhǔn)品：將50 mL 1.0mM標(biāo)準(zhǔn)液與450 mL蒸餾水混合，配制

500 mL 100 mM預(yù)混液。使用1.5mL離心管，如下表所示稀釋標(biāo)準(zhǔn)液。

2、反應(yīng)：將100 mL樣品加入分別標(biāo)記的離心管中。

（我們建議樣品的檢測(cè)需一式兩份）。準(zhǔn)備足夠的工作試劑，按每個(gè)反應(yīng)管混合： 55 mL試劑A，55 mL試劑B和110 mL試劑C。在每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)管中加入200 mL工作試劑，在60℃下反應(yīng)10分鐘（也可在37℃下反應(yīng)60分鐘, 或常溫下反應(yīng)150分鐘）

3、測(cè)量：短暫離心去除沉淀顆粒，轉(zhuǎn)移250 mL反應(yīng)產(chǎn)物到96孔板的不同孔中。在540nm (500-570nm) 處讀取吸光值。

比色皿測(cè)定步驟

標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的準(zhǔn)備與96孔板檢測(cè)步驟相同, 但用量需增至4倍。反應(yīng)完成后，轉(zhuǎn)移1mL至比色皿中，讀取OD540nm 。

美國(guó)BioAssay Systems一氧化氮（NO)）測(cè)試盒濃度計(jì)算

從標(biāo)準(zhǔn)品的OD值中減去空白對(duì)照（Std 4）的OD值。繪制OD與標(biāo)準(zhǔn)濃度的曲線, 通過(guò)線性回歸計(jì)算斜率（Slope），樣品的NO濃度計(jì)算如下：

ODSAMPLE 和 ODBLANK 分別是樣品和水的吸光值。

單位換算：1 mg/dL NO 相當(dāng)于333 mM、0.001%或10 ppm。

實(shí)驗(yàn)必需品(未提供)

移液裝置，離心管，離心機(jī)，加熱板或熱水浴。

96孔板檢測(cè)：透明平底96孔板、96孔板吸光率閱讀儀。

比色皿檢測(cè)：比色皿、分光光度儀。

備注：抗氧化劑和親核試劑（如：b-巰基乙醇、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇和半胱氨酸）可能會(huì)干擾這項(xiàng)檢測(cè)，因此樣品制備過(guò)程中應(yīng)避免使用這類化合物。

96孔板檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

美國(guó)BioAssay Systems一氧化氮（NO)）測(cè)試盒

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