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MKRed（效果同GelRed）核酸染料（10,000× 水溶液）

MKRed核酸凝膠染料特點(diǎn)

● 無毒性：MKRed *的油性和大分子量特點(diǎn)使其不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果也表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于EB。

● 靈敏度高：適用于各種大小片段的電泳染色，對(duì)核酸遷移的影響小于SYBR Green I。

● 穩(wěn)定性高：適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠；室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定，耐光性強(qiáng)。

● 信噪比高：樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低。

● 操作簡單：與 EB 一樣，在預(yù)制膠和電泳過程中染料不降解；而電泳后染色過程也只需30 分鐘且無需脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。

● 與EB有相同的光譜特性，無需改變?yōu)V光片及觀察裝置：標(biāo)準(zhǔn)的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都適用，使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在 300nm 紫外光附近可得到zui好激發(fā)。但是MKRed不能被488 nm氬離子激光器或相似波長的可見光*激發(fā)，因此不推薦使用此類激發(fā)裝置的成像系統(tǒng)。對(duì)于此類裝置，我們推薦您使用DuGreen（Cat# 011或012），它和SYBR Green I的光譜相似，靈敏度相當(dāng)，但更加穩(wěn)定。

核酸凝膠染料使用方法簡介

1．膠染法（用法同EB）（推薦方法）

（1）制膠時(shí)加入MKRed 核酸染料（例如：每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL MKRed 10,000× 儲(chǔ)液，

以此比例類推）。

（2）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

注意事項(xiàng)：

♦ 此方法染色染料用量相對(duì)較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。

♦ 由于MKRed具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將MKRed儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。MKRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。

♦ 如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關(guān)，請(qǐng)嘗試：降低瓊脂糖濃度；選用更長的凝膠；延長凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰；改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。

♦ 此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠，對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請(qǐng)使用泡染法。

2．泡染法

（1）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

（2）用H2O將MKRed 10,000× 儲(chǔ)液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液。（例如將15μL MKRed 10,000× 儲(chǔ)液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中）。

（3）將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右，zui合適染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對(duì)于含3.5～10％丙烯酰胺的凝膠，染色時(shí)間通常介于30min到1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長。

注意事項(xiàng)：

♦ 用泡染法染色時(shí)，染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。

♦ 3× MKRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。

幾種核酸染料比較

名稱	靈敏度	穩(wěn)定性	對(duì)DNA 遷移的影響	安全性	適用性
MKRed	高	高	條帶不彎曲，DNA片段不遷移	是一種的油性大分子，不易揮發(fā)升華，不易吸入人體，不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)，安全無毒。艾姆斯氏測試結(jié)果表明，MKRed在凝膠染色濃度下沒有誘變性，因此*沒有致癌毒性。	通用大小片段電泳染色，與EB有相同的光譜特性，無需改變?yōu)V光片及觀察裝置。標(biāo)準(zhǔn)的EB濾光片或SYBR濾光片都適用，使用普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在300nm紫外光附近可得到zui好激發(fā)。
MKGreen	高	高	條帶不彎曲，DNA片段不遷移	① 是一種的油性大分子，不易揮發(fā)升華，不易吸入人體，不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)，安全無毒。 ② 艾姆斯氏測試結(jié)果表明，DuGreen在凝膠染色濃度下沒有誘變性，因此*沒有致癌毒性。	通用大小片段電泳染色，適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。
SYBR Green I	高	低	染料濃度較高時(shí)，條帶容易彎曲，DNA片段遷移的現(xiàn)象明顯	屬花箐染料，能透過細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)，但容易生物降解，不會(huì)在體內(nèi)殘留，安全無毒。	100bp以上電泳染色，適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。
EB	低	高	條帶不彎曲，DNA片段不遷移	① 分子量小，易揮發(fā)升華，易吸入人體，不易生物降解，在體內(nèi)長期殘留。 ② 艾姆斯氏測試結(jié)果表明，EB容易引起有機(jī)體突變，是一種強(qiáng)誘變劑，具有高致癌性。	100bp以上電泳染色，背景熒光信號(hào)高；使用普通紫外凝膠透射儀觀察。
Goldview	低	高	條帶不彎曲，DNA片段不遷移	① 主要成分為吖啶橙，是一種煤焦油提取物，具有高毒，致癌，高誘變性。 ② 易揮發(fā)升華，易吸入人體，能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)，不易生物降解，在體內(nèi)長期殘留。	100bp以上電泳染色，背景熒光信號(hào)高；適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。