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江蘇菲亞生物科技有限公司
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ELISA試劑盒檢測(cè)方法
2017-3-9 閱讀(803)
zui近，站上關(guān)于ELISA試劑盒的討論帖子非常多，今天也發(fā)表一下自己的一些看法，對(duì)ELISA的見解有不對(duì)的地方，希望指正或者直接拍磚。如何靈活應(yīng)用ELISA這個(gè)檢測(cè)方法以及如何去挑選ELISA試劑盒。ELISA這個(gè)方法的原理，大家都很清楚，網(wǎng)上的資料一大堆。可真正用起來(lái)的時(shí)候，有時(shí)候就有點(diǎn)犯糊涂，我談一下自己的理解。
ELISA試劑盒檢測(cè)方法簡(jiǎn)述:
1)間接法測(cè)抗體：將特異性抗原包被在固相載體上，形成固相抗原，加入待檢標(biāo)本（含相應(yīng)抗體），其中抗體與固相抗原形成抗原-抗體復(fù)合物，再加入酶標(biāo)記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體，亦稱二抗），與上述抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。此時(shí)加入底物，復(fù)合物上的酶則催化底物而顯色。
雙抗體夾心法測(cè)抗原：將已知的特異性抗體包被在固相載體上，形成固相抗體，加入待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗原)，抗原與固相抗體結(jié)合成復(fù)合物，再加入特異性酶標(biāo)抗體，使之與已形成的抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合，當(dāng)加入與酶相應(yīng)的底物時(shí)，酶催化底而顯色，根據(jù)顏色的有無(wú)和顏色的深淺對(duì)待測(cè)抗原進(jìn)行定性和定量。
ELISA試劑盒競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原：將特異性抗體與固相聯(lián)結(jié)，形成固相抗體，加入待測(cè)標(biāo)本（含相應(yīng)抗原）和相應(yīng)的一定量的酶標(biāo)抗原，待測(cè)標(biāo)本中的抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，待測(cè)標(biāo)本中抗原含量越高，則與固相抗體結(jié)合亦越多，使得酶標(biāo)抗原與固相抗體結(jié)合的機(jī)會(huì)就越少，甚至沒有機(jī)會(huì)結(jié)合。加入底物后不顯色或顯色很淺，顯色深者為陰性。
酶聯(lián)免疫試驗(yàn)的量反應(yīng)分析：不同的酶聯(lián)免疫方法檢測(cè)結(jié)果的OD值均與標(biāo)本中待檢的抗原或抗體的量相關(guān)（間接法和夾心法正相關(guān)，競(jìng)爭(zhēng)法負(fù)相關(guān)），因此可以利用OD值對(duì)標(biāo)本中的待檢物質(zhì)進(jìn)行定量分析。
酶聯(lián)免疫試驗(yàn)質(zhì)反應(yīng)分析：ELISA試劑盒根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本OD值，對(duì)標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)做出有或無(wú)的判定.
