ELISA 實(shí)驗(yàn)通常以細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿以及組織裂解物等為樣品。該實(shí)驗(yàn)*三種試劑：固相的抗原或抗體；酶標(biāo)記的抗原或抗體；酶作用的底物。根據(jù)樣品的性質(zhì)、檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)條件、試劑的來(lái)源，可設(shè)計(jì)出不同類(lèi)型的ELISA檢測(cè)方法。

一、直接ELISA

原理：將抗原與固相載體連接，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加酶標(biāo)抗體進(jìn)行孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。加底物反應(yīng)。直接法主要用于測(cè)定抗原。

優(yōu)點(diǎn)：操作流程簡(jiǎn)短，實(shí)驗(yàn)步驟少；無(wú)需使用二抗，避免了交叉反應(yīng)；實(shí)驗(yàn)步驟少，操作不易出錯(cuò)。

缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)中的一抗需要直接用酶標(biāo)記，成本相對(duì)較高。

二、間接法ELISA

原理：將抗原與固相載體相連結(jié)，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，加酶標(biāo)二抗。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合，從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，加底物顯色。

優(yōu)點(diǎn)：酶標(biāo)二抗可加強(qiáng)信號(hào)，提高靈敏度；靈活性更大，同一酶標(biāo)二抗可應(yīng)用于多種不同的一抗；不直標(biāo)一抗，可保留更多的免疫反應(yīng)性；成本更低，使用標(biāo)記抗體更少。
 

缺點(diǎn)：交叉反應(yīng)幾率升高。

三、雙抗夾心法ELISA

原理：雙抗體夾心法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子，但不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。加入待檢樣品，保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。加酶標(biāo)抗體（檢測(cè)抗體）保溫孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。加底物反應(yīng)。

雙抗原夾心法測(cè)抗體的反應(yīng)模式與測(cè)抗原相似，用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。
 

優(yōu)點(diǎn)：高特異性，使用的捕獲抗體與檢測(cè)抗體都是檢測(cè)特異性的；適用于復(fù)雜樣品，抗原不需要進(jìn)行純化即可用于檢測(cè)；靈活性更大，靈敏度更高，可采用直接法也可采用間接法。
 

缺點(diǎn)：檢測(cè)物需要擁有兩個(gè)以上不同的抗原表位或多個(gè)相同的重復(fù)表位；不適用于檢測(cè)小分子物質(zhì)。

四、競(jìng)爭(zhēng)法ELISA

原理：競(jìng)爭(zhēng)法ELISAzui為復(fù)雜，通常用于檢測(cè)小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競(jìng)爭(zhēng)相同的有*抗體，當(dāng)樣品中的游離抗原越多，就可結(jié)合越多的抗體，而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體。反之亦然。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結(jié)合物，只留下固相抗原與抗體的結(jié)合物。顯示經(jīng)計(jì)算可得樣品中抗原的含量。競(jìng)爭(zhēng)法可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置直接法、間接法或夾心法形式。