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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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ELISA試劑盒技術(shù)進(jìn)行定量的平臺化方法
2019-9-25 閱讀(230)
ELISA試劑盒定量方法的類型和構(gòu)架
來用 ELISA技術(shù)進(jìn)行定量的平臺化方法——般來說可以分為兩類,即間接法和直接法。
間接法也稱為竟?fàn)幏?直接法也稱雙抗夾心法
今天,我們重點(diǎn)為大家介紹直接法。
直接法以定量抗原為例
首先,以與抗原有強(qiáng)親和力的抗體包被同定在酶標(biāo)板材上,加入抗原標(biāo)準(zhǔn)品/樣品反應(yīng),再加入與抗原有強(qiáng)親和力的抗體并且偶
聯(lián)了辣根過氧化氫酶HRP/堿性磷酸酶AP的酶聯(lián)抗體反應(yīng),后加入酶對應(yīng)的底物顯色,中間通過洗滌去除反應(yīng)體系中未結(jié)
的試劑成分。
這樣信號大小和抗原的濃度成正相關(guān),隨著反應(yīng)的進(jìn)行酶標(biāo)板材上定的成分由抗體,轉(zhuǎn)變?yōu)榭贵w-抗原,后變?yōu)榭贵w-抗原-
酶聯(lián)抗體,待測的抗原處于兩個抗體之間,所以也稱為雙抗夾心法。
雙抗夾心法有一個關(guān)鍵點(diǎn):待檢測的物質(zhì)(如抗原)必須給包被抗體和酶聯(lián)抗體提供兩個結(jié)合位點(diǎn),這兩個位點(diǎn)可以是抗原上
兩個以上相同的結(jié)構(gòu)位點(diǎn),也可以是不同的結(jié)構(gòu)位點(diǎn)。
一般來說, Elisae的構(gòu)架由標(biāo)進(jìn)品,內(nèi)控品,空白對照,基質(zhì)對照和待測樣品組成。
內(nèi)控品
其中,內(nèi)控品是能夠使用的、獨(dú)立分裝的、特定濃度(高中低)的標(biāo)準(zhǔn)品,是監(jiān)控 ELISA實(shí)驗在單次實(shí)驗中的質(zhì)量和
的應(yīng)用過程中不同批次標(biāo)準(zhǔn)品的過渡橋接。
空白對
空白對照為不含標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,基質(zhì)對照則為不含樣品的樣品溶液一一兩者可能是一樣的成分,也可能是不同的成分,
需要根據(jù)實(shí)驗的具體情況進(jìn)行區(qū)分,目的是確認(rèn) ELISA體系中是否有非特異的交又反應(yīng)
