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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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田鼠痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳分析
2020-6-23 閱讀(135)
田鼠痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳分析時(shí)沒有條帶或條帶很淺
1)常見的原因在于您的反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系
3) 與反應(yīng)起始時(shí)RNA的總量及純度有關(guān)
4) 建議在試驗(yàn)中加入對(duì)照RNA
5) 一鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過1/10
6) 建議用Oligo(dT)或隨機(jī)引物代替基因特異性引物（GSP）用于一鏈合成。由于RNA模板存在二級(jí)結(jié)構(gòu)，如環(huán)狀結(jié)果，有可能導(dǎo)致GSP無法與模板退火；或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無法從此引物進(jìn)行有效延伸。
7) 目的mRNA中含有強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄中止位點(diǎn)，可以試用以下方法解決：
a. 將一鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。
b. 使用隨機(jī)六聚體代替Oligo(dT)進(jìn)行一鏈反應(yīng)。
