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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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牛免疫球蛋白G（IgG）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒技術(shù)參數(shù)
2018-12-13 閱讀(186)
| 提 供 商 | 上海莼試生物技術(shù)有限公司 | 資料大小 | 82.7KB |
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| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 25次 | |
| 資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 186次 |
牛免疫球蛋白G(IgG)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測定標(biāo)本中牛免疫球蛋白G(IgG)水平。用純化的牛免疫球蛋白G(IgG)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的免疫球蛋白G(IgG)標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的促黃體激素(LH)待檢樣品，溫育后，加入標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白G(IgG)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中牛免疫球蛋白G(IgG)濃度。
試劑盒組成
1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
8
標(biāo)準(zhǔn)品S1（24μg/ml）
0.5ml×1瓶
2
鏈霉親和素-HRP
6ml×1瓶
標(biāo)準(zhǔn)品S2（16μg/ml）
0.5ml×1瓶
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8條
標(biāo)準(zhǔn)品S3（8μg/ml）
0.5ml×1瓶
4
標(biāo)記的抗-IgG抗體
6ml×1瓶
標(biāo)準(zhǔn)品S4（4μg/ml）
0.5ml×1瓶
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
標(biāo)準(zhǔn)品S5（2μg/ml）
0.5ml×1瓶
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
9
說明書
1份
7
終止液
6ml×1瓶
10
封板膜
2張
牛免疫球蛋白G(IgG)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒標(biāo)本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，在樣本反應(yīng)孔中加入50微升樣本，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。
加標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
洗滌：操作同4。
加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
洗滌：操作同4。
顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。
如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
線形范圍：
1.5μg/ ml -30μg/ ml
規(guī)格：
96人份/盒
牛免疫球蛋白G(IgG)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月
