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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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大鼠elisa試劑盒對(duì)植物激素含量測(cè)定方法
2017-9-18 閱讀(284)
大鼠elisa試劑盒對(duì)植物激素（planthormone）免疫定量主要有放射免疫分析（RIA）和酶聯(lián)吸附免疫分析（ELISA），由于前者操作上欠安全等原因，目前常采用后一種類型。
一、材料、 儀器 設(shè)備及試劑
（一）材料：高等植物、真菌、藻類等組織或器官。
（二） 儀器 設(shè)備：1. 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀；2. 高速冷凍離心機(jī)；3. 恒溫箱；4. 連續(xù)進(jìn)樣器；5. 渦旋儀；6. 96孔微孔板；7. 離心管；8. 研缽或勻漿器；9. 試管。
（三） 試劑 1. 洗滌緩沖液：0.01mol/L pH7.4磷酸緩沖液（PBS），含0.05％Tween-0；2. RAMIG溶液，或“激素-蛋白”復(fù)合物；3. 0.1％封閉蛋白（該蛋白應(yīng)不同于免疫原中的載體蛋白）；4. 抗激素Mab，或Pab；5. 激素標(biāo)準(zhǔn)品母液，及參比系列溶液（按雙倍或四倍系列稀釋）；6. HRP標(biāo)記激素，或HRP-GARIG；7. 鄰苯二胺（OPD）基質(zhì)液：5mgOPD溶于12.5ml0.01mol/L pH5.0PBS，用前加入30％H 2 O 2 12.5μl。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
固相抗體型ELISA。
1. 用方陣法滴定選擇各反應(yīng)物zui適工作濃度；
2. 將100μlRAMIG溶液包被聚苯乙烯反應(yīng)板微孔，4℃濕盒，12h；
3. 棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗滌3次，甩干；
4. 加入100μl抗激素Mab溶液，37℃70min；
三、計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實(shí)際濃度。 注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 大鼠elisa試劑盒封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
標(biāo)準(zhǔn)品 102767-28-2 標(biāo)準(zhǔn)品 Levetiracetam 200mg
外消旋混合物標(biāo)準(zhǔn)品 33996-58-6 外消旋混合物標(biāo)準(zhǔn)品 Levetiracetam Racemic Mixture 15mg
相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 102767-31-7 相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg
相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 7682-20-4 相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 20mg
標(biāo)準(zhǔn)品 82626-48-0 標(biāo)準(zhǔn)品 Zolpidem CIV 10mg
相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
唑來(lái)瞵酸相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 22884-10-2 唑來(lái)瞵酸相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 30mg
唑尼沙胺標(biāo)準(zhǔn)品 68291-97-4 唑尼沙胺標(biāo)準(zhǔn)品 Zonisamide 200mg
大鼠elisa試劑盒
