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公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細(xì)胞的訂購(gòu)信息：

英文簡(jiǎn)稱：FAK+/+細(xì)胞    

產(chǎn)品名稱：小鼠成纖維細(xì)胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：成纖維細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS

傳代方法：    1:4~1:8傳代；

貨號(hào)：CS-X64035
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：
（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞在對(duì)數(shù)生，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過(guò)度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
細(xì)胞抗原75(LY75)檢測(cè)試劑盒英文名稱：LY75 ELISA Kit胰羧肽酶A1抗體包裝5g

細(xì)胞功能關(guān)聯(lián)抗原2(LFA2)檢測(cè)試劑盒英文名稱：LFA2 ELISA Kit羧肽酶A2抗體包裝1g

β(LTβ)檢測(cè)試劑盒英文名稱：LTβ ELISA Kit腦源性球蛋白超家族蛋白3抗體包裝250mg

豐富重復(fù)LGI家族成員3(LGI3)檢測(cè)試劑盒英文名稱：LGI3 ELISA Kit胰羧肽酶B1抗體包裝5g

豐富α2-糖蛋白1(LRG1)檢測(cè)試劑盒英文名稱：LRG1 ELISA Kit維酸結(jié)合蛋白2抗體包裝1g

連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)檢測(cè)試劑盒英文名稱：CTNNβ1 ELISA Kit2號(hào)染色體開放閱讀框80抗體包裝1g

粒細(xì)胞趨化蛋白2(GCP2)檢測(cè)試劑盒英文名稱：GCP2 ELISA Kit磷酸化CD32B抗體包裝250mg

類(TPS)檢測(cè)試劑盒英文名稱：TPS ELISA Kit過(guò)敏素C3（補(bǔ)體C3）抗體包裝5g

類固醇5α還原酶1(SRD5α1)檢測(cè)試劑盒英文名稱：SRD5α1 ELISA Kit癌胚抗原相關(guān)粘附分子抗體包裝10mg

蘭尼定受體1(RYR1)檢測(cè)試劑盒英文名稱：RYR1 ELISA Kit質(zhì)多聚腺苷酸結(jié)合蛋白1抗體包裝1g

賴氨酰氧化酶樣蛋白2(LOXL2)檢測(cè)試劑盒英文名稱：LOXL2 ELISA Kit半蛋白酶抑制劑7抗體包裝25g

賴氨酰氧化酶樣蛋白1(LOXL1)檢測(cè)試劑盒英文名稱：LOXL1 ELISA Kit22號(hào)染色體開放閱讀框29抗體包裝5g

賴氨酰氧化酶(LOX)檢測(cè)試劑盒英文名稱：LOX ELISA Kit神經(jīng)表面蛋白F3包裝1g

賴氨酸tRNA合成酶(KARS)檢測(cè)試劑盒英文名稱：KARS ELISA Kit組織蛋白酶C抗體包裝5g

醌NADH脫氫酶1(NQO1)檢測(cè)試劑盒英文名稱：NQO1 ELISA Kit半胱酸蛋白酶蛋白-4抗體包裝100g
FAK+/+細(xì)胞降鈣素原(PCT)檢測(cè)試劑盒英文名稱：PCT ELISA Kit淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體包裝250mg

降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)檢測(cè)試劑盒英文名稱：CGRP ELISA Kit淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1抗體包裝1g

降鈣素(CT)檢測(cè)試劑盒英文名稱：CT ELISA Kit轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體包裝25g

堿性磷酸酶(ALP)檢測(cè)試劑盒英文名稱：ALP ELISA Kit卵巢、胎盤、前列腺、蛋白22抗體包裝5g

堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF/FGF2)檢測(cè)試劑盒英文名稱：bFGF/FGF2 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白33B抗體包裝1g

堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)檢測(cè)試劑盒英文名稱：bFGF ELISA Kit載脂蛋白C3抗體包裝5g

狀腺素抗體(TAb)檢測(cè)試劑盒英文名稱：TAb ELISA Kit凋亡增強(qiáng)核酸酶抗體包裝1g

狀腺素(T4)檢測(cè)試劑盒英文名稱：T4 ELISA Kit染色體脆弱性相關(guān)基因抗體包裝1g

狀腺球蛋白(TG)檢測(cè)試劑盒英文名稱：TG ELISA Kit磷酸化蛋白激酶B抗體包裝25g

狀腺過(guò)氧化物酶(TPO)檢測(cè)試劑盒英文名稱：TPO ELISA Kit銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體包裝5g

狀旁腺相關(guān)蛋白(PTHrP)檢測(cè)試劑盒英文名稱：PTHrP ELISA Kit?；铣擅讣易?抗體包裝1g

狀旁腺(PTH)檢測(cè)試劑盒英文名稱：PTH ELISA Kit酸性磷酸酶樣蛋白2抗體包裝25g

種胎兒球蛋白/胎蛋白(AFP)檢測(cè)試劑盒英文名稱：AFP ELISA KitAHNAK核蛋白2抗體包裝5g

基化酶(Methylase)檢測(cè)試劑盒英文名稱：Methylase ELISA Kit二磷酸腺苷核糖基化因子6相互作用蛋白抗體包裝1g

己糖激酶(HK)檢測(cè)試劑盒英文名稱：HK ELISA Kitp53誘導(dǎo)蛋白5抗體包裝250mg
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。