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上海莼試生物技術有限公司
主營產品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格,ELISA試劑盒報價 |

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公司信息
- 聯(lián)系人:
- 李小姐
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- 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661號
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參考價 | 面議 |
- 型號 T25
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質 經銷商
- 所在地 上海市
更新時間:2021-08-23 15:23:41瀏覽次數(shù):293
聯(lián)系我們時請說明是環(huán)保在線上看到的信息,謝謝!
公司產品僅用于科研以下是細胞的訂購信息:
英文簡稱:U266B1細胞
產品名稱: 外周淋巴細胞
規(guī)格:T25
形態(tài)特性:淋巴母細胞樣
生長特性:懸浮生長
特征特性: 該細胞系是由N.K. Nilsson于1970年從一名53歲患有骨髓瘤男性的外周血中分離建立的。免疫學研究表明,該細胞和體內骨髓瘤細胞表達相同的免疫球蛋白。
培養(yǎng)條件:RPMI1640+15%FBS
傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
貨號:CS-X63905
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態(tài),細胞在對數(shù)生,細胞密度適合,剛剛發(fā)生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌消化過度,吹打不可太用力,不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室,使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
空泡單胞菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
裂褶菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Glaciimonas immobilis
Glaciimonas用途: 與紫云英共生固氮
中慢生華癸根瘤菌拉丁屬名: Ganoderma lucidum
靈芝拉丁屬名: Sporidiobolus salmonicolor
鮭色鎖擲酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
釀酒酵母拉丁屬名: Pseudomonas aeruginosa
銅綠假單胞菌拉丁屬名: Bacillus thioparans
產硫芽孢桿菌拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
釀酒酵母拉丁屬名: Streptomyces purpureus
絳紅鏈霉菌拉丁屬名: danailovi
丹氏艾美耳球蟲拉丁屬名: Lentinula edodes
香菇拉丁屬名: Bacillus cereus
(蠟狀芽胞桿菌)拉丁屬名: Pseudonocardia dioxanivorans
食二雜環(huán)己烷假諾卡氏菌拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
U266B1細胞新內酯(標準品)英文名稱: Tenacissoside H粘附分子3抗體(脊髓灰質炎病受體相關蛋白3)包裝5g
新地奧斯明英文名稱: Cucurbitacin E螺旋環(huán)螺旋蛋白2抗體包裝1g
新綠原酸(標準品)英文名稱: Koumine胚胎發(fā)育相關蛋白Nodal抗體包裝5g
新芒果苷(標準品)英文名稱: Gelsemine增殖相關蛋白NANOS1抗體包裝1g
新藤黃酸(標準品)英文名稱: Procyanidin B1同源盒蛋白NOBOX抗體包裝5g
新烏頭原堿(標準品)英文名稱: Cyasterone轉錄因子NAC1抗體包裝100g
杏葉防風(標準品)英文名稱: Tetrahydroberberine,THB神經生長因子受體抗體包裝25g
雄蠶蛾(家蠶)(標準品)英文名稱: Tenacissoside I磷酸化KB抑制蛋白激酶ε包裝500g
熊膽粉(標準品)英文名稱: Tenacissoside G磷酸化神經纖毛蛋白1抗體包裝1g
熊果苷(標準品)英文名稱: Praeruptorin C1型神經纖維瘤抗體包裝250mg
熊果酸;烏蘇酸(標準品)英文名稱: Pterostilbene磷酸化1型神經纖維瘤抗體包裝5g
繡線菊(標準品)英文名稱: Pterostilbene中心粒蛋白Nudel抗體包裝100g
溴東莨菪堿(標準品)英文名稱: Rotenone磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體包裝25g
徐長卿(標準品)英文名稱: 7-Epitaxol類固脫氫酶樣蛋白NSDHL抗體包裝25g
續(xù)斷(川續(xù)斷)(標準品)英文名稱: Solasodine磷酸化核因子p50/k基因結合核因子抗體包裝5g
實驗報告
一、產分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。