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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：人類白細(xì)胞抗原（HLA-B27）PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP99946
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
固氮菌聚集蛋白抗體Human KHDC1 ELISA Kit小鼠熱休克因子1(HSF1)免疫試劑盒

葡萄座腔菌調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體Human KHDC3L ELISA Kit小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)免疫試劑盒

檸檬黃色紅色桿菌調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體Human KDSR ELISA Kit小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)免疫試劑盒

中國(guó)臺(tái)灣根霉間變型淋巴瘤激酶抗體Human KHSRP ELISA Kit小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒

煙色擬盤多毛孢α-甲基酰基消旋酶抗體Human KHDRBS3 ELISA Kit小鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)免疫試劑盒

假單胞菌屬膜粘連蛋白A1抗體Human KIF1C ELISA Kit小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)免疫試劑盒

葡萄座腔菌自噬相關(guān)蛋白1抗體Human KIF20A ELISA Kit小鼠熱休克蛋白27(HSP-27)免疫試劑盒

膠孢β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16 抗體Human KIAA1191 ELISA Kit小鼠熱休克蛋白20(Hsp-20)免疫試劑盒

洋蔥伯克霍爾德氏菌腺瘤肉調(diào)節(jié)蛋白抗體Human KIAA1468 ELISA Kit小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)免疫試劑盒

乳粉  乳酸菌計(jì)數(shù) 銜接因子蛋白含pH域蛋白1抗體Human CEMIP(Cell migRation-inducing and hyaluronan-binding protein) ELISA Kit小鼠固酮(ALD)免疫試劑盒

德氏乳桿菌德氏亞種水通道蛋白-7抗體Human KIAA1429 ELISA Kit小鼠(NA)免疫試劑盒

波蘭青霉氨基轉(zhuǎn)移酶1抗體Human KIAA1530 ELISA Kit小鼠趨化因子配體1(CCL1)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌p21活化蛋白激酶ARHG7抗體Human KIAA1602 ELISA Kit小鼠趨化因子(FK)免疫試劑盒

三寶壟根霉磷酸化肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體Human KIDINS220 ELISA Kit小鼠趨化因子(CC基序)配體2(MRC2)免疫試劑盒

淺黃微桿菌2-氨基乙硫雙加氧酶抗體Human KIAA0430 ELISA Kit小鼠(HYD)免疫試劑盒

松杉靈芝血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體Human KIAA1984 ELISA Kit小鼠羥甲基戊二酸單酰還原酶(HMG-CoAR)免疫試劑盒
人類白細(xì)胞抗原（HLA-B27）PCR檢測(cè)試劑盒鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>800μg/mg,USP,BR碳酸酐酶6試劑盒酚;Kaempferol

唾液乳桿菌水楊素亞種Lactobacillus│salivarius subsp. salicinuus 質(zhì)量規(guī)格：>800μg/mg,含量測(cè)定碳酸酐酶3試劑盒山梔苷甲酯;hanzhiside met

微桿菌屬Microbacterium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,BR,可用于培養(yǎng)碳酸酐酶2試劑盒雙氫;Dihydroartemis

高氏鏈霉菌Streptomyces│goshikiensis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品碳酸酐酶12試劑盒芍藥內(nèi)酯苷;Albiflorin

地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR碳酸酐酶試劑盒芍藥苷;Paeoniflorin

海底嗜冷桿菌Psychrobacter│submarinus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品肽酰脯氨酰異構(gòu)酶試劑盒升麻酮-3-O-L-阿拉伯糖苷;Cim

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：BR級(jí)，可用于培養(yǎng)，純度99%以上,三水合物,USP30肽聚糖識(shí)別蛋白L試劑盒蛇床子素;Osthole

白色產(chǎn)色鏈霉菌Streptomyces│albochromogenes 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定肽聚糖試劑盒升麻素;Cimifugin

新月彎孢Curvularia│lunata 質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP6.0肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶試劑盒圣草次苷;Eriocitrin