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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格,ELISA試劑盒報價 |

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公司信息
- 聯(lián)系人:
- 李小姐
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- 地址:
- 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661號
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參考價 | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間:2022-03-30 10:38:34瀏覽次數(shù):249
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)定性PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號:CP100131
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品分類:RT-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶?
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
大腸埃希菌1號染色體開放閱讀框159抗體Human PLCγ1(Phospholipase C Gamma 1) ELISA Kit人絲蟲病抗體(IgG4)免疫試劑盒
糙皮側(cè)耳1號染色體開放閱讀框162抗體Human PLB(Phospholipase B) ELISA Kit人肽酶抑制劑,Kazal 1型(SPINK1)免疫試劑盒
食油假單胞菌1號染色體開放閱讀框163抗體Human PKC(Protein Kinase C) ELISA Kit人肽酶2甘露聚糖結(jié)合凝集素(MASP2)免疫試劑盒
1號染色體開放閱讀框122抗體Human PLCγ2(Phospholipase C Gamma 2, Phosphatidylinositol Specific) ELISA Kit人蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進(jìn)化枝3G(Serpina3g)免疫試劑盒
亮白曲霉1號染色體開放閱讀框123抗體Human PKR1(Prokineticin Receptor 1) ELISA Kit人蛋白酶HTRA1(HTRA1)免疫試劑盒
烏克蘭毛霉1號染色體開放閱讀框124抗體Human PFKP(Phosphofructokinase, Plaet) ELISA Kit人/激酶24(STK24)免疫試劑盒
短柄帚霉2號染色體開放閱讀框3抗體Human PGAM1(PhosphoglyceRate Mutase 1) ELISA Kit人/蛋白磷酸酶(STK)免疫試劑盒
鼠李糖乳桿菌1號染色體開放閱讀框127抗體Human PKR2(Prokineticin Receptor 2) ELISA Kit人/蛋白激酶PAK4(PAK4)免疫試劑盒
產(chǎn)氣腸桿菌*1號染色體開放閱讀框129抗體Human PL(Placental Lactogen) ELISA Kit人/蛋白激酶B-raf(BRAF)免疫試劑盒
新疆鹽單胞菌1號染色體開放閱讀框130抗體Human PLA1(Phospholipase A1) ELISA Kit人瞬態(tài)電壓感受器陽離子通道,子類V,成員4(TrpV4)免疫試劑盒
禾谷鐮孢菌1號染色體開放閱讀框131抗體Human PGF2α(Prostaglandin F2α) ELISA Kit人瞬態(tài)電壓感受器陽離子通道,子類V,成員1(TrpV1)免疫試劑盒
總狀共頭霉1號染色體開放閱讀框135抗體Human PGD2S(Prostaglandin D2 Synthase, Brain) ELISA Kit人瞬時受體電位陽離子通道,亞科C,成員6(TRPC6)免疫試劑盒
大孢聯(lián)軛霉1號染色體開放閱讀框141抗體Human PLA2G10(Phospholipase A2, Group X) ELISA Kit人水閘蛋白14(CLDN14)免疫試劑盒
黑曲霉1號染色體開放閱讀框144抗體Human PLA2G12B(Phospholipase A2, Group XII B) ELISA Kit人水通道蛋白5(AQP-5)免疫試劑盒
圍小叢殼COPA蛋白抗體Human PLA2G4D(Phospholipase A2, Group IV D) ELISA Kit人水通道蛋白4抗體(AQP-4 Ab)免疫試劑盒
1號染色體開放閱讀框185抗體Human PGRP-S(Peptidoglycan Recognition Protein-S) ELISA Kit人水通道蛋白3(AQP-3)免疫試劑盒
牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)定性PCR檢測試劑盒伊拉克固氮螺菌Azospirillum irakense 質(zhì)量規(guī)格:BR,鉑含量 ≥46%,原始鉑粉純度>99.95% 胱天蛋白酶9試劑盒蘆丁(+)-三水合蕓香苷-對照品;有報告
曲霉屬Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白酶8試劑盒靛藍(lán);有報告-對照品;有報告
霍氏腸桿菌Enterobacter│hormaechei 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白酶-5試劑盒沒食子酸-對照品;有報告
熒光假單胞菌Pseudomonas│fluorescens 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白酶3試劑盒黃芪甲苷(黃芪皂苷IV)-對照品;有報告
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白酶12試劑盒甲素(內(nèi)酯)-對照品;有報
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白酶10試劑盒野百合堿(豬屎豆堿)-對照品;有報告
氯生鏈霉菌Streptomyces│chlorobiens 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白酶1試劑盒冬凌草甲素-對照品;有報告
托姆青霉Penicillium│thomii 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱硫β-合酶試劑盒D-果糖;標(biāo)準(zhǔn)品
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胍基丁脲水解酶/凝集酶試劑盒三聚;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。