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公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細(xì)胞的訂購(gòu)信息：

英文簡(jiǎn)稱(chēng)：M14細(xì)胞    

產(chǎn)品名稱(chēng)：黑色素瘤細(xì)胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：

生長(zhǎng)特性：混合生長(zhǎng)

特征特性：

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS

傳代方法： 1:3傳代

貨號(hào)：CS-X64075
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：
（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞在對(duì)數(shù)生，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過(guò)度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很?chē)?yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
Corin蛋白(CRN)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CRN ELISA KitCD80抗體包裝250mg

Cerberus蛋白(CER)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CER ELISA KitCD19抗體包裝1g

CD83分子(CD83)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CD83 ELISA KitC-C元件趨化因子26抗體包裝250mg

CD5抗原樣蛋白(CD5L)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CD5L ELISA Kit5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框22抗體包裝25g

CD40配體(CD40L)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CD40L ELISA Kit鈣激活離子通道4蛋白抗體包裝5g

CD3d分子(CD3d)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CD3d ELISA Kit嗜酸粒趨化蛋白3抗體包裝1g

CD320分子(CD320)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CD320 ELISA Kit嗜酸粒趨化蛋白3抗體包裝250mg

CD30配體(CD30L)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CD30L ELISA Kit趨化素抗體包裝25g

CD163分子(CD163)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CD163 ELISA Kit5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框55抗體包裝5g

CD14分子(CD14)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CD14 ELISA Kit表面趨化因子受體7抗體包裝1g

CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(CEBPβ)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CEBPβ ELISA Kit色素c氧化酶7A2抗體包裝5g

C4結(jié)合蛋白α(C4BPα)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：C4BPα ELISA KitCD36抗體包裝100g

B-細(xì)胞瘤因子2(Bcl2)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：Bcl2 ELISA Kit固酮合成酶CYP11B2抗體包裝25g

B-細(xì)胞激活因子受體(BAFFR)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：BAFFR ELISA Kit7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框16抗體包裝5g

B-細(xì)胞激活因子(BAFF)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：BAFF ELISA Kit10號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框62抗體包裝1g
M14細(xì)胞磺酰化物（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Glipizide癌胚抗原相關(guān)粘附分子1抗體包裝500ml

鎂（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Donepezil HCl趨化樣因子受體1抗體包裝1g

鈉一合物（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Estrone造血干抗原CD133抗體包裝1g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： EstroneG蛋白偶聯(lián)受體相互作用蛋白1抗體（補(bǔ)體Clq TNF相關(guān)蛋白1）包裝250mg

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Clindamycin HCl心肌營(yíng)養(yǎng)素1抗體包裝5g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Clindamycin HClC型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員B抗體包裝5g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Verapamil HCl陽(yáng)離子通道相關(guān)蛋白β亞基抗體包裝1g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Verapamil HCl特異性蛋白57抗體包裝250mg

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Mycophenolic acidL選擇素抗體包裝1g

鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Mycophenolic acidCD53抗體包裝25g

巴卡丁 III（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Amoxicillin 死亡同源蛋白6抗體包裝5g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Amoxicillin 離子通道KB抗體包裝25g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： FenofibrateC型凝集素結(jié)構(gòu)域家族12成員A抗體包裝5g

巴芬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： Fenofibrate離子通道蛋白2抗體包裝1g

巴芬雜質(zhì)A（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： ProbenecidC型凝集素結(jié)構(gòu)域家族9成員A抗體包裝25mg
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。