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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時間：2017-06-01 08:52:53瀏覽次數(shù)：349
聯(lián)系我們時請說明是環(huán)保在線上看到的信息，謝謝!
公司是*的ATCC細胞供應商，提供非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4A；Vero-HCV-NS4A的報價，咨詢，稱技術(shù)服務(wù)，咨詢選購。
細胞名稱 非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4A；Vero-HCV-NS4A
形態(tài)特性 上皮樣細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 Vero-HCV-NS4A細胞整合有丙型肝炎病毒的NS4A基因，能穩(wěn)定表達NS4A蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學病毒學國家重點實驗室郭佳博士于2008年構(gòu)建并保存。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C24
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境：首先應保證被培養(yǎng)的細胞處于無菌、無毒的環(huán)境，即對培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。
2、營養(yǎng)物質(zhì)：細胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。
3、溫度和pH：細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動物的體溫相近。多數(shù)細胞生存的適宜pH為7.2～7.4。
4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進行細胞培養(yǎng)時，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
ADIPOQ cDNA Mouse 小鼠 ADIPOQ 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
ADIPOQ cDNA Mouse 小鼠 ADIPOQ 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
CTLA4 cDNA Mouse 小鼠 CTLA4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
CTLA4 cDNA Mouse 小鼠 CTLA4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
PDGFA cDNA Mouse 小鼠 PDGFA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
PDGFA cDNA Mouse 小鼠 PDGFA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
CD80 cDNA Mouse 小鼠 B7-1 / CD80 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
CD80 cDNA Mouse 小鼠 B7-1 / CD80 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
CD5 cDNA Mouse 小鼠 CD5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
TIMD4 cDNA Mouse 小鼠 TIMD4 / TIM4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
TNFSF13B cDNA Mouse 小鼠 BAFF / TNFSF13B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
TNFSF13B cDNA Mouse 小鼠 BAFF / TNFSF13B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
TNFSF11 cDNA Mouse 小鼠 TNFSF11 / CD254 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
RSPO1 cDNA Mouse 小鼠 RSPO1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
RSPO1 cDNA Mouse 小鼠 RSPO1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
ANGPT2 cDNA Mouse 小鼠 ANGPT2 / ANG2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
ANGPT2 cDNA Mouse 小鼠 ANGPT2 / ANG2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
TGFBR1 cDNA Mouse 小鼠 TGFBR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
IL13 cDNA Mouse 小鼠 IL13 / ALRH 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
IL13 cDNA Mouse 小鼠 IL13 / ALRH 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
TNFSF10 cDNA Mouse 小鼠 TNFSF10 / TRAIL 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
TNFSF10 cDNA Mouse 小鼠 TNFSF10 / TRAIL 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
TLR3 cDNA Mouse 小鼠 TLR3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
VEGFA cDNA Mouse 小鼠 VEGF-A 轉(zhuǎn)錄變體3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
VEGFA cDNA Mouse 小鼠 VEGF-A 轉(zhuǎn)錄變體3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
