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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時(shí)間:2017-06-01 09:00:50瀏覽次數(shù):332
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細(xì)胞名稱 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞株源自CV-1細(xì)胞株,經(jīng)轉(zhuǎn)染起始點(diǎn)缺失的SV40病毒突變體得到;編碼表達(dá)野生型T抗原,所以該細(xì)胞適合作為需要SV40 T抗原表達(dá)的載體的轉(zhuǎn)染宿主。該細(xì)胞表達(dá)T抗原,允許SV40病毒的溶解性生長(zhǎng),支持40℃時(shí)溫度敏感性A209毒的復(fù)制,支持起始區(qū)域缺陷的SV40突變體的復(fù)制。因含有SV40毒的DNA序列,該細(xì)胞需要在*中操作。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%NBS
傳代方法 1:3傳代;3-4天一次
傳代情況 PN2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體 51-129
使用權(quán)限 A類
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 前處理 用臺(tái)稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動(dòng)物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時(shí)后,將動(dòng)物處死,用剪刀剪開(kāi)皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來(lái)回搓干凈。剪開(kāi)兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時(shí)間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細(xì)胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細(xì)胞均勻分散,在酒精燈火焰上來(lái)回烤一下,以助染色體更好分散和展開(kāi)。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項(xiàng):
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們。
2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
AREG cDNA Human 人 AREG 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
GDF2 cDNA Human 人 GDF2 / BMP-9 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
AGTR2 cDNA Human 人 AGTR-2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
ADRB2 cDNA Human 人 ADRB2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
AGTR1 cDNA Human 人 AGTR1 / AT1 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
SHH cDNA Human 人 SHH / Sonic Hedgehog 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
ITGA6 cDNA Human 人 ITGA6 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
LGALS8 cDNA Human 人 Galectin-8 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
PCSK1 cDNA Human 人 PCSK1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
TGFBR1 cDNA Human 人 TGFBR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
CDH1 cDNA Human 人 E-Cadherin 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
EREG cDNA Human 人 EREG 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
TGFA cDNA Human 人 TGFA 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
FCGR4 cDNA Mouse 小鼠 CD16-2 / FCGFR4 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
MS4A1 cDNA Human 人 MS4A1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
PRICKLE2 cDNA Human 人 PRICKLE2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
PMP22 cDNA Human 人 PMP22 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
HA cDNA H4N6 甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
HA cDNA H8N4 甲型流感 H8N4 (A/pintail duck/Alberta/114/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
HA cDNA H10N3 甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
HA cDNA H12N5 甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽