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上海莼試生物技術(shù)有限公司

主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒報(bào)價(jià)

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SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;PUMC-HUVEC-T1
SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;PUMC-HUVEC-T1
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更新時(shí)間:2017-06-08 11:41:20瀏覽次數(shù):518

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【簡單介紹】
SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;PUMC-HUVEC-T1 ,采用干冰保存運(yùn)輸收到細(xì)胞時(shí),若干冰已經(jīng)*融化,請立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng);若尚留有干冰,請立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用,請按條件貯存細(xì)胞,切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商,提供SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;PUMC-HUVEC-T1 的報(bào)價(jià),咨詢,稱技術(shù)服務(wù),咨詢選購。
細(xì)胞名稱  SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;PUMC-HUVEC-T1  
形態(tài)特性   上皮樣  
生長特性  貼壁生長  
特征特性   PUMC-HUVEC-T1形態(tài)呈現(xiàn)為典型的鵝卵石樣排列,已證明在體外可傳至40代。PUMC-HUVEC-T1內(nèi)皮標(biāo)記vWF、CD31、CD34均陽性,可結(jié)合凝集素,電鏡下可見緊密連接和W-P小體,Matrigle上可形成管型。不同代數(shù)的HUVEC-T1細(xì)胞核型正常穩(wěn)定(P12、P13、P19、P38),裸鼠體內(nèi)接種不成瘤(P9和P33)。   
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS 40μU/L胰島素 + 40U/ml 肝素 + 1% NEAA  
傳代方法   1:3~1:4傳代,一周1~2次  
傳代情況  P12  
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS  
支原體檢測  培養(yǎng)法(-)  
STR   Amelogenin:X;CSF1PO:11,12;D13S317:11,13;D16S539:9,12;D18S51:16,17;D21S11:28,30;D2S1338:17,19;D3S1358:15,17;D5S818:11,13;D6S1043:11,14;D7S820:8,11;D8S1179:13,14;FGA:24;Penta E:15,17;vWA:14,16;  
同工酶    
染色體   46,XX  
使用權(quán)限  A類培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境:首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境,即對培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。

2、營養(yǎng)物質(zhì):細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同,需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。

3、溫度和pH:細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動(dòng)物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2~7.4。

4、氣體環(huán)境:培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2,O2是細(xì)胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
注意事項(xiàng):  
如需抗體回收再利用,建議在2-8℃進(jìn)行抗體的結(jié)合反應(yīng),以減緩抗體效價(jià)的衰減速度。  
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。  
儲(chǔ)存條件:  
-20℃保存,有效期為 2 年。短期可 2-8℃保存  
中文名稱:Bouin's脫鈣液  
英文名字:bouin氏脫鈣液  
產(chǎn)品介紹:  
組織脫鈣,主要由PA、甲醛、甲酸等組成。  
中文名稱:DAB顯色試劑盒(20×)  
英文名字:DAB顯色試劑盒(20×)  
產(chǎn)品簡介:      
二氨基聯(lián)苯胺(Diaminobenzidine,DAB)是過氧化物酶(POD)的顯色底物,DAB顯色液主要用于免疫過氧化物酶法,適用于辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記的免疫印記或免疫組化反應(yīng)。過氧化物酶催化底物發(fā)生反應(yīng),于反應(yīng)部位產(chǎn)生棕色沉淀物。免疫印記可直接在膜上顯示條帶;免疫組化標(biāo)本顯色時(shí)間一般為室溫5-20分鐘,隨后在顯微鏡下觀察顯況,顯色充分后應(yīng)將標(biāo)本及時(shí)脫水封固。其終產(chǎn)物可直接在光鏡下觀察,也可OsO4處理后,增加反應(yīng)產(chǎn)物的電子密度,用于電鏡觀察。  
操作說明:  
1. 對于組織切片或蛋白質(zhì)印記膜,在與辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后,用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次,每次3-5分鐘。  
2. 取900ul PBS(或雙蒸水),加入50ul溶液A,50ul溶液B混合均勻,即配成DAB工作液。     如需要更大體積工作液,可按比例放大。此溶液必須現(xiàn)用現(xiàn)配,配好后避光保存,1小時(shí)內(nèi)使用,過期后請將剩余的液體廢棄。  
3. 向組織切片或印記膜上加入適量DAB工作液,確保能充分覆蓋樣品。   
4. 室溫避光孵育3-10 分鐘或更長時(shí)間,避免光照,直至顯色至預(yù)期深淺。   
5. 去除DAB染色工作液,用蒸餾水洗滌2-3次即可終止顯色反應(yīng)。   
6. 對于組織切片或細(xì)胞樣品,顯色反應(yīng)終止后,可對其進(jìn)行其他染料復(fù)染。對于膜,顯色反應(yīng)終止后,可以室溫晾干避光保存。  
注意事項(xiàng):  
1. DAB溶液應(yīng)低溫密封保存。如有結(jié)晶析出,應(yīng)確保結(jié)晶*溶解再行使用;  
2. 顯色工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配,新鮮配制的工作液應(yīng)為無色或淺棕色,如顏色過深,請勿使用;  
3. 顯色時(shí)間嚴(yán)格控制,根據(jù)情況調(diào)整,以免顯色過度。固相膜顯色數(shù)小時(shí)后即會(huì)褪色,不能*存在;  
4. DAB為可疑致癌物,請采取必要的防范措施。操作時(shí)應(yīng)戴手套,盡量避免與皮膚接觸,用后及時(shí)*沖洗,接觸DAB的實(shí)驗(yàn)用品洗液浸泡24h后使用。  
中文名稱:EDTA抗原修復(fù)液(1X,pH9)  
英文名字:EDTA Antigen Retrieal Solution(1×,pH9)  
產(chǎn)品描述  
      細(xì)胞或組織用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇,同時(shí)蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽,導(dǎo)致免疫染色時(shí)染色信號減弱,甚至出現(xiàn)一些假陰性染色結(jié)果。所以要求在進(jìn)行免疫組化染色時(shí),需要行抗原修復(fù)或暴露,即將固定時(shí)分子之間所形成的交聯(lián)破壞,而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。從而提高抗原的檢出率,降低背景染色,提高檢測的準(zhǔn)確性。  
EDTA抗原修復(fù)液(EDTA  Antigen Retrieal solution,1×)是一種常用的抗原修復(fù)液,可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復(fù)??梢杂行コ╊惞潭ㄔ噭?dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián),充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,從而大大改善免疫染色效果。  
通常石蠟切片都需進(jìn)行抗原修復(fù)處理,而冰凍切片可以不進(jìn)行抗原修復(fù)處理??乖迯?fù)可以提高石蠟切片的免疫染色效果,亦可以不同程度的提高冰凍切片的染色效果。當(dāng)冰凍切片免疫染色效果不理想時(shí),考慮進(jìn)行抗原修復(fù)。  
按照每個(gè)片子需要10ml抗原修復(fù)液(1×)計(jì)算,100ml抗原修復(fù)液(1×)可以用于10個(gè)樣本的抗原修復(fù)。  
產(chǎn)品優(yōu)勢  
 能有效去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián),充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,從而大大改善免疫染色效果。  
儲(chǔ)存條件  
 冷藏(2-8℃)  
注意事項(xiàng)  
1. 抗原修復(fù)時(shí)應(yīng)選擇溫度。(溫度在92℃-98℃是合適的,尤其在95℃為)  
2. 抗原修復(fù)液必須遵循自然降溫規(guī)律,否則效果不好或達(dá)不到抗原修復(fù)的目的。  
3. 抗原修復(fù)的方法,都采用加熱的方法,尤其是微波輻射加熱法,該法由于產(chǎn)熱快。液體容易揮發(fā)直至干涸。此,應(yīng)用于抗原修復(fù)的液體,一定要充足,防止切片干涸。  
4. 用于抗原修復(fù)的切片,必須附貼牢固,否則發(fā)生掉片,則前功盡棄。  
5. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。  
中文名稱:EDTA抗原修復(fù)液(50X,pH9)  
英文名字:EDTA Antigen Retrieal Solution(50X,pH9)  
產(chǎn)品描述  
 



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