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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：病毒性神經(jīng)壞死癥(VNN))定性PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP100149
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：RT-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
抗生素溶桿菌皮質(zhì)素1抗體Human GLP2(Glucagon Like Peptide 2) ELISA Kit人前列腺素E1(PGE1)免疫試劑盒

串珠鐮刀菌8號染色體開放閱讀框70抗體Human GLUT2(Glucose Transporter 2) ELISA Kit人前列腺素D合成酶(PGDS)免疫試劑盒

氧化微桿菌胰羧肽酶E抗體Human GKN1(Gastrokine 1) ELISA Kit人前列腺素D2(PGD2)免疫試劑盒

菌核青霉磷酸化角蛋白18抗體Human GLUT4(Glucose Transporter 4) ELISA Kit人前列腺素A1(PGA1)免疫試劑盒

類芽孢桿菌20號染色體開放閱讀框112抗體Human GM-CSF Ab(Anti-Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor Antibody) ELISA Kit人前列環(huán)素(PGI2)免疫試劑盒

明尼蘇達(dá)被毛孢10號染色體開放閱讀框88抗體Human Glyoxalase I(GLO1) ELISA Kit人前顆粒蛋白(PGRN)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌富含半C端蛋白1抗體Human GNβ1(G Protein Beta 1) ELISA Kit人前膠原C內(nèi)肽酶增強(qiáng)子1(PCOLCE1)免疫試劑盒

海神弧菌E1A激活基因激蛋白2抗體Human GP-73(Golgi Protein 73) ELISA Kit人前膠原C端肽酶(PCP)免疫試劑盒

棒桿菌壁合成蛋白43抗體Human GDN(Glia Derived Nexin) ELISA Kit人前動(dòng)力蛋白1(PROK1/EG-VEGF)免疫試劑盒

茯苓19號染色體開放閱讀框29抗體Human GH2(Growth Hormone 2) ELISA Kit人前病整合位點(diǎn)1(Pim1)免疫試劑盒

運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單孢菌*磷酸化p21蛋白抗體Human GHAb(Anti-Growth Hormone Antibody) ELISA Kit人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)免疫試劑盒

短裙竹蓀東北變種*磷酸化周期檢測點(diǎn)激酶2抗體Human GPⅡb/Ⅲa(Plaet Membrane Glycoprotein Ⅱb/Ⅲa complex) ELISA Kit人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(GLUT3)免疫試劑盒

金黃殼囊孢磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體Human GHITM(Growth Hormone Inducible Transmembrane Protein) ELISA Kit人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)免疫試劑盒

乳酸桿菌磷酸化周期素依賴性激酶2抗體Human GADL1(Glutamate Decarboxylase Like Protein 1) ELISA Kit人葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)免疫試劑盒

長枝木霉磷酸化周期檢測點(diǎn)激酶1抗體Human GA(Glycated Albumin) ELISA Kit人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)免疫試劑盒

黑平188磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體Human GABA(Gamma-aminobutyric acid) ELISA Kit人葡萄糖激酶(GCK)免疫試劑盒
病毒性神經(jīng)壞死癥(VNN))定性PCR檢測試劑盒: 黃色南海桿菌 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,甘草提取鈣結(jié)合蛋白S100A13 elisa試劑盒3β-乙?；?/span>

越南芽孢桿菌Bacillus│vietnamensis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品鈣結(jié)合蛋白試劑盒3-表

鏈格孢Alternaria│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品鈣激活6試劑盒甲基小檗堿

淡紫灰鏈霉菌Streptomyces│lavendulae 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品鈣激活1試劑盒氧化小檗堿