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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細(xì)胞的訂購信息：

英文簡稱：HuO9細(xì)胞    

產(chǎn)品名稱：骨肉瘤細(xì)胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：

生長特性：

特征特性：

培養(yǎng)條件：

傳代方法：

貨號：CS-X64057

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：
（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞在對數(shù)生，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過，問題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)檢測試劑盒英文名稱：MCP2 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白144A抗體包裝25g

單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP1)檢測試劑盒英文名稱：MCP1 ELISA Kit周期素B3抗體包裝1g

單氨氧化酶A(MAOA)檢測試劑盒英文名稱：MAOA ELISA Kit羧肽酶X(M14家族2)抗體包裝25g

存活素(Surv)檢測試劑盒英文名稱：Surv ELISA Kit上皮鈣粘附分子結(jié)合蛋白E7包裝5g

簇集蛋白(CLU)檢測試劑盒英文名稱：CLU ELISA Kit周期素D結(jié)合蛋白1抗體包裝1g

促胰液素(SCT)檢測試劑盒英文名稱：SCT ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白120抗體包裝5g

促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)檢測試劑盒英文名稱：TPPP ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白23抗體包裝1g

促泌素(SCGN)檢測試劑盒英文名稱：SCGN ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白89抗體包裝25g

刺猬因子相互作用蛋白(HHIP)檢測試劑盒英文名稱：HHIP ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白30抗體包裝5g

核糖基轉(zhuǎn)移酶1(HPRT1)檢測試劑盒英文名稱：HPRT1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白40抗體包裝5mg

雌受體β(ERβ)檢測試劑盒英文名稱：ERβ ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白114抗體包裝100g

雌受體α(ERα)檢測試劑盒英文名稱：ERα ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白39抗體包裝25g

垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(ADCYAP1)檢測試劑盒英文名稱：ADCYAP1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白34抗體包裝25g

穿孔素1(PRF1)檢測試劑盒英文名稱：PRF1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白75抗體包裝5g

成纖維細(xì)胞生長因子受體3(FGFR3)檢測試劑盒英文名稱：FGFR3 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白65抗體包裝25g
HuO9細(xì)胞17b-hydroxyandrost-4-ene-3-...英文名稱： OxaliplatinCD163蛋白樣1抗體包裝1mg

17α-Methyltestosterone（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Oxiconazole Nitrate周期素依賴性激酶5調(diào)節(jié)蛋白1樣蛋白1抗體包裝1g

1，3-（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Oxytetracycline HCl22號染色體開放閱讀框31抗體包裝250mg

1，6-二氫-2-基-6-氧代-（3，4’-二吡啶）...英文名稱： Oxytetracycline HCl分裂周期37樣蛋白1抗體包裝1g

2,3,4-三氧基苯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Oxytocin Acetate羧肽酶X(M14家族1)抗體包裝250mg

2,3,4-三氧基苯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Paclitaxel卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白135抗體包裝100g

2,3,4-三氧基苯酸（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Paclitaxel跨膜結(jié)構(gòu)域邊緣蛋白CEE抗體包裝25g

2,3-丁二酮(標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))英文名稱： Palonosetron HCl分子伴侶CESK1蛋白抗體包裝500g

2,3-二氫-6-苯基咪唑【2,1-b】噻唑鹽酸鹽（鹽...英文名稱： Paromomycin Sulfate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體包裝5g

2,6-二（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Paromomycin SulfateCDK5激活結(jié)合蛋白1抗體包裝100g

2,6-二基酚（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Pazufloxacin Mesilate磷酸化表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體包裝25g

2-（4-異丁酰苯基）酸（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Pazufloxacin Mesilate腫瘤/抗原1B/1A包裝25g

2-氨基-4-（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Pefloxacin mesylate dihydrate磷酸化分裂周期蛋白25B抗體包裝5g

2-苯乙酰（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Pefloxacin mesylate dihydrate跨膜蛋白12抗體包裝1g

2-單（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Pemetrexed Disodium球蛋白超家族成員16抗體包裝250mg