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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：犬源性成分(Canine)PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP99995
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光-PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
白色勞瑟爾氏菌色素b5還原酶3抗體Human FHL1 ELISA Kit豚鼠25羥基3(25 HVD3)免疫試劑盒

果生鏈核盤菌CWC22蛋白抗體Human FGFR1OP2 ELISA Kit兔ELSIA試劑盒

三峽1號（平菇類）9號染色體開放閱讀框95抗體Human FHL3 ELISA Kit兔組織因子途徑抑制物(TFPI)免疫試劑盒

綿皮臥孔菌（可訂購）19號染色體開放閱讀框67抗體Human FEV ELISA Kit兔子組織因子(TF)免疫試劑盒

葡萄座腔菌磷酸化酪蛋白激酶1γ1+γ2+γ3抗體Human FGF13 ELISA Kit兔子組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)免疫試劑盒

鹽單胞菌原卟啉氧化酶3抗體Human FHL2 ELISA Kit兔子組織多肽抗原(TPA)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌間隙連接蛋白43抗體Human FGF18 ELISA Kit兔子組(HIS)免疫試劑盒

綠色木霉緊密連接蛋白25抗體Human FBXO3 ELISA Kit兔子總堿性磷酸酶(TALP)免疫試劑盒

榛黃假單胞菌中心體蛋白78抗體Human FGF16 ELISA Kit兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)免疫試劑盒

大腸桿菌6號染色體開放閱讀框146抗體Human FGF17 ELISA Kit兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體受體3(TRAIL-R3)免疫試劑盒

釀酒酵母6號染色體開放閱讀框154抗體Human FDFT1 ELISA Kit兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌9號染色體開放閱讀框16抗體Human FBXO41 ELISA Kit兔子中性粒彈性蛋白酶(NE)免疫試劑盒

鏈霉菌屬9號染色體開放閱讀框78抗體Human FBXO43 ELISA Kit兔子脂聯(lián)素(ADP)免疫試劑盒

長枝木霉9號染色體開放閱讀框79抗體Human FBXO6 ELISA Kit兔子脂多糖/內(nèi)素(LPS)免疫試劑盒

植物乳桿菌植物亞種9號染色體開放閱讀框84抗體Human FBXW2 ELISA Kit兔子脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌9號染色體開放閱讀框85抗體Human FBXO2 ELISA Kit兔子粘蛋白1(MUC1)免疫試劑盒
犬源性成分(Canine)PCR檢測試劑盒: 中國臺灣鞘氨醇單胞菌 質(zhì)量規(guī)格：>98%,MAO-B selective inhibitor硫酸雌酮試劑盒甲基麥冬黃烷酮A;Methylophio

枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格：>98%硫嘌呤S-甲基轉(zhuǎn)換酶試劑盒7-甲氧基;7-Methoxyco

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%流行性乙型腦炎抗體IgG試劑盒長春質(zhì)堿;Catharanthin

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品流行性乙型腦炎抗體試劑盒枸櫞酸血根堿;Sanguinarine

球孢白僵菌Beauveria│bassiana 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,BR流行性腦脊髓膜炎抗體試劑盒長春瑞濱;VinorelbineT

乳酸乳球菌Lactococcus lactis 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)流行性腦脊髓膜炎抗體試劑盒金合歡素;Acacetin

克雷伯氏菌Klebsiella│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品流感病抗體IgG試劑盒;D(-)-Tartaric ac

乳酸乳球菌Lactococcus│lactis 質(zhì)量規(guī)格：>98%流感B病抗體IgG elisa試劑盒甲酸;Formic acid
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。