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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細胞的訂購信息：

英文簡稱：SW954細胞    

產(chǎn)品名稱：陰戶鱗癌細胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：上皮細胞

生長特性：貼壁生長

特征特性：

培養(yǎng)條件：Leibovitz's L-15+10%FBS

傳代方法：1:CQ-1:6傳代，2-3天換液1次。

貨號：CS-X64006

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。

注意事項：
（1）凍存前細胞狀態(tài)，細胞在對數(shù)生，細胞密度適合，剛剛發(fā)生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態(tài)不好，而且消化時不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
實驗報告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
抑制素βE(INHβE)檢測試劑盒英文名稱：INHβE ELISA Kit核糖體合成蛋白BOP1抗體包裝5g

抑制素βC(INHβC)檢測試劑盒英文名稱：INHβC ELISA Kit調(diào)節(jié)中心體分離早期相關(guān)激酶BORA抗體包裝1g

抑制素βB(INHβB)檢測試劑盒英文名稱：INHβB ELISA Kit萊姆病螺旋體抗體包裝5g

抑制素βA(INHβA)檢測試劑盒英文名稱：INHβA ELISA Kit成熟相關(guān)蛋白BOULE抗體包裝5mg

異戊烯半氧化酶1(PCYOX1)檢測試劑盒英文名稱：PCYOX1 ELISA Kit伸長因子結(jié)合蛋白抗體包裝100ml

乙酰輔酶A羧化酶α(ACACα)檢測試劑盒英文名稱：ACACα ELISA Kit特異性堿性蛋白Y2抗體包裝25ml

乙醇脫氫酶7(ADH7)檢測試劑盒英文名稱：ADH7 ELISA Kit癌易感基因2相關(guān)蛋白抗體包裝1mg

乙醇脫氫酶1(ADH1)檢測試劑盒英文名稱：ADH1 ELISA Kit磷酸化癌易感基因1抗體包裝1g

胰腺再生蛋白Ⅳ(REG4)檢測試劑盒英文名稱：REG4 ELISA Kit磷酸化癌易感基因1抗體包裝5g

胰高血糖素樣肽1受體(GLP1R)檢測試劑盒英文名稱：GLP1R ELISA Kit磷酸化上皮鈣粘附分子抗體包裝100g

胰高血糖素樣肽1(GLP1)檢測試劑盒英文名稱：GLP1 ELISA Kit磷酸化癌易感基因1抗體包裝25g

胰多肽(PP)檢測試劑盒英文名稱：PP ELISA KitBRD2蛋白抗體包裝500g

胰淀素(IAPP)檢測試劑盒英文名稱：IAPP ELISA KitBRD3蛋白抗體包裝5g

胰α2(AMY2)檢測試劑盒英文名稱：AMY2 ELISA Kit磷酸化蛋白激酶6/腫瘤激酶抗體包裝1g

胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(IGFBP7)檢測試劑盒英文名稱：IGFBP7 ELISA Kit磷酸化蛋白激酶ATK抗體包裝250mg
SW954細胞循環(huán)復(fù)合物(CIC)檢測試劑盒英文名稱：CIC ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體包裝500g

血小板因子4(PF-4/CXCL4)檢測試劑盒英文名稱：PF-4/CXCL4 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體包裝1g

血小板因子3(PF-3)檢測試劑盒英文名稱：PF-3 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體包裝1g

血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)檢測試劑盒英文名稱：PDGFsR-α ELISA Kit氫離子轉(zhuǎn)運ATP合成酶6G抗體包裝5g

血小板衍生生長因子CC(PDGF-CC)檢測試劑盒英文名稱：PDGF-CC ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體包裝5ml

血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)檢測試劑盒英文名稱：PDGF-BB ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體包裝100mg

血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)檢測試劑盒英文名稱：PDGF-AB ELISA Kit型肝炎病核結(jié)合蛋白-1抗體包裝1g

血小板衍生生長因子AA(PDGF-AA)檢測試劑盒英文名稱：PDGF-AA ELISA Kit芳香基硫酸酯酶K抗體包裝100MG

血小板生長因子(PDGF)檢測試劑盒英文名稱：PDGF ELISA Kit神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體包裝50MG

血小板生成素(TPO)檢測試劑盒英文名稱：TPO ELISA Kit錨定蛋白G抗體包裝25g

血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)檢測試劑盒英文名稱：GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61 ELISA Kit肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體包裝5g

血小板活化因子(PAF)檢測試劑盒英文名稱：PAF ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與1型抗體包裝1g

血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)檢測試劑盒英文名稱：TSP-1 ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與1型-7抗體 (N端抗體)包裝250mg

血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)檢測試劑盒英文名稱：FDP ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與1型-7抗體包裝5g

血纖蛋白原γ鏈(FGG)檢測試劑盒英文名稱：FGG ELISA Kit內(nèi)收蛋白抗體包裝250mg