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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

大鼠骨骼肌分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細(xì)胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張，進(jìn)行隨意運(yùn)動。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）。明帶染色較淺，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線。H線的中部有一M線。明帶中間，有一條較暗的線稱為Z線。兩個Z線之間的區(qū)段，叫做一個肌節(jié)。骨骼肌細(xì)胞也稱橫紋肌細(xì)胞，細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方，細(xì)胞多呈梭行，具有一定的方向性。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠骨骼肌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠骨骼肌成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機(jī)"，這時有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai proteinase 3 aibody IgG (PR3 Ab-IgG) ELISA Kit 人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3 Ab-IgG)ELISA試劑盒

Porcinehepatocytegrowthfactor,HGFELISAKit 豬肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfora-Glu(MouseAlpha-Glucosidase)ELISAKit小鼠α葡萄糖苷酶規(guī)格：48T/96T

血液乳酸脫氫酶(LDH)總活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20次

Mouseansforminggrowthfactorα,TGF-αELISAKit小鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物血凝素   5mg

Lectin,fromArachisHypogaea(pean)

植物血凝素   5mg

Lectin,fromiticumvulgaris

小鼠抗(AT)ELISA 試劑盒

Rat ai monocyte aibody (AMA) ELISA Kit 大鼠抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA試劑盒

HumanfibrinopeptideB,FPBELISAKit 人血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAmebiasisELISA試劑盒人阿米巴(Amebiasis)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物單酚氧化酶(monophenolase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

MonkeyIerleukin2,IL-2ELISAKit猴白介素2(IL-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

BST1重組大鼠 CD157 / BST1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

Galanin 神經(jīng)節(jié)肽 0.5mgGalanin 神經(jīng)節(jié)肽

CXCL1重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽) Protein

AGER Protein Human 重組人 AGER / RAGE 蛋白

SLAMF8 Protein Mouse 重組小鼠 SLAMF8 / BLAME 蛋白 (His 標(biāo)簽)

大鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞Galanin 神經(jīng)節(jié)肽 0.5mgGalanin 神經(jīng)節(jié)肽

AGER Protein Human 重組人 AGER / RAGE 蛋白

BST1重組大鼠 CD157 / BST1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

SLAMF8 Protein Mouse 重組小鼠 SLAMF8 / BLAME 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CXCL1重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽) Protein